主题：【第十六届原创】高效液相色谱法测定果蔬中7种氨基甲酸酯类农药基质效应讨论

高效液相色谱法测定果蔬中7种氨基甲酸酯类农药基质效应讨论

    选择6种果蔬基质对7种氨基甲酸酯类农药在液相色谱上的基质效应进行了比较，通过比较发现发现这6种果蔬对7种氨基甲酸酯类农药均存在不同程度的基质增强效应或者基质减弱效应，基质效应的强弱和农药的浓度之间没有很强的关联，与蔬菜的种类和农药的结构、极性的强弱有关。 所选择实验的7种氨基甲酸酯类农药是河南省农产品质量安全例行检测项目，研究其在果蔬中的基质效应，以准确定量。

    一、材料与方法

    （一）试验仪器及试剂

    液相色谱仪Agilent 1260高效液相色谱仪（二元泵），配荧光检测器（FLD），柱后衍生系统为美国科学系统公司的斯威特柱后衍生系统双通道PCR-2型、匀浆机、振荡器、氮吹仪及分析实验室常用设备。

    乙腈（色谱纯）、丙醇（色谱纯）、甲醇（色谱纯）、氯化钠、柱后衍生试剂为pickering公司提供（包含邻苯二甲醛，OPA，巯基乙醇、OPA稀释剂和氢氧化钠溶液）。

    农药标准品：涕灭威、涕灭威亚砜、涕灭威砜、克百威、三羟基克百威、甲萘威、灭多威购自农业部环境保护科研监测所（100μg/mL）。

    （二）实验方法

    根据《蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留检测方法》（NY/T 761-2008）进行检测。

    （三）试验材料

    苹果、梨、葡萄、西红柿、黄瓜、西葫芦

    （四）标准溶液的配置

    标准溶液由农业部环境保护科研监测所提供，质量浓度均为100μg/mL。有机磷标液用丙酮稀释至10.0μg/mL；有机氯标液用正已烷稀释至10.0μg/mL。

    二、试验条件和过程

    （一）实验条件

    色谱柱：安捷伦C18柱4.6mm×100mm,粒度3.5um；柱温：42℃；检测波长：激发波长330nm,发射波长465nm；进样口温度：250℃，氮气流速：30mL/min；柱流速：2mL/min。柱后衍生：0.05mol/L氢氧化钠溶液，流速0.3mL/min，水解温度100℃；OPA试剂，流速0.3mL/min，衍生温度室温度。

表1：溶剂梯度与流速

    （二）样品前处理

    样品前处理样品前处理参考农业行业标准 NY /T761-2008，称取25.0g待测样品放入150mL烧杯，量取50.0mL乙腈加入烧杯中，在均质机中12000 r/min均质2min后过滤，将滤液收集在盛有5~7g氯化钠（含水分较多的蔬菜，氯化钠可加10g左右）的具塞量筒中，收集滤液50mL，剧烈振摇1min，开盖排气，室温下静置30min，用移液管量取10.00mL上层乙晴溶液放入50mL烧杯里，将烧杯80℃水浴氮吹近干，加入2.0mL甲醇加二氯甲烷（1:99）待净化。将净化液加入活化好的氨基柱，用离心管收集洗脱液，再用4mL甲醇加二氯甲烷（1:99）分2次洗烧杯后过柱，在50℃水浴氮吹近干，用甲醇定容至5.0mL。0.22um滤膜过滤后上机检测。选择不含有7种氨基甲酸酯类农药的样品为空白样品，作为基质配标准溶液。

    （三）实验过程

    先将上述7种氨基甲酸酯类农药的标准品用甲醇稀释成5ug/ mL的混合标准溶液，然后每种蔬菜空白样品取6份，按照样品前处理方法，每份空白样品提取液为5ml，氮吹近干后用5ug/ ml的混合标准溶液稀释，配制成0.005μg/mL、0.01μg/mL、0.02μg / mL、0.05μg / mL、0.1μg/mL、0.5μg/ mL浓度梯度的基质标准溶液。用甲醇水将5μg/m混合标准溶液稀释成同样浓度梯度的溶剂标准溶液。

    （四）结果分析

    按上述仪器条件，将6种果蔬空白基质7种氨基甲酸酯类农药上机检测，该方法可以实现目标化合物完全分离。

表2 ：7种氨基甲酸类农药在溶液、黄瓜基质标准溶液校准曲线

表3：7种氨基甲酸酯类农药在6种果蔬中基质效应的差异性分析

    表3中可以看出7种氨基甲酸酯类农药在6种果蔬中均有不同程度的基质效应，同一种农药在不同瓜类蔬菜中的基质效应也不相同。涕灭威在6种果蔬中都是基质抑制效应，涕灭威亚砜、甲萘威、灭多威在6种果蔬中都是基质增强效应。

    研究还发现，基质效应的强弱还与氨基甲酸酯类农药在色谱柱内保留时间有很大关系。保留时间长的农药，极性强，基质效应较强；保留时间较短的农药，基质效应相对较弱。

    三、结论

    不同种农药在不同蔬菜中均有不同程度的基质效应，同一种农药在不同蔬菜中的基质效应也不相同，为了准确定量，可用基质匹配标准曲线以降低农药基质效应，提高检测结果的准确度。