主题:【第十六届原创】HPLC顽固残留去污记

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HPLC顽固残留去污记

通标小菜



近日在用液相样品进行日常测试的时候,偶然发现目标峰走出来的峰型有点异常,正常的时候目标峰出峰位置处就是平齐的基线,不会有波动和鼓包,目标物色谱峰峰底处变宽。这种情况对于纯度测试会产生不利影响,主峰峰面积会偏高。



查看了过往的样品测试记录,这种情况是在某一点开始的,之后走的样品均出现不同程度的异常。起初以为是样品基底本身带来的干扰影响,后来通过连续运行多次空白发现并不是样品本身引起,而是仪器系统带来的残留干扰。



为了解决这一问题,尽快让测试恢复正常,于是便开始查找原因。最先排查的是色谱柱,因为色谱柱是比较容易有残留的,将这根一直用的色谱柱拆下,接在另外一台仪器上运行空白,发现有残留鼓包,说明这根色谱柱本身的确是有残留存在的。



于是采取措施,将色谱柱重新接好,加大有机相比例,低流速冲洗柱子和整个系统,同时在冲洗的过程中提高柱温,以便让残留更快的流出。经过了长时间的冲洗后,需要检查此法是否有效,通过进空白发现原先的残留鼓包有明显缩小,说明冲洗起码起效了。继续按照此法进行冲洗,后续发现鼓包基本维持稳定,不再继续缩小。为验证是否除柱子以外液相系统管路也有残留,便拿了另外一根同尺寸同型号的色谱柱替换被冲洗的柱子,运行空白后发现残留鼓包也是有的,这根柱子在另外一台仪器上走没有残留,换到这台仪器上走就有残留,说明除了之前有残留的色谱柱以外,仪器系统内部管路也有顽固残留。



为了去除仪器系统残留,首先把所有的流动相都换新,包括洗针溶液,换完后继续冲洗柱子及整个系统,每冲一段时间走一针溶剂空白,看看残留是否有所变化,然而还是效果不佳。通过与同事之间的讨论,发现之前忽略了进样系统这一块,这里也是很容易出现残留污染的,但是平常冲柱以及冲洗管路都是无法顾及到这里的。

虽然平常走样都设置了洗针,但洗针每次进样量也只有5ul,可能无法完全冲洗干净,特别是样品环以及计量泵那一部分。随后便对进样管路这一段进行冲洗,准备空白溶剂至2ml进样小瓶,设置进样体积至最大100ul,此时在进样的时候就有足够大体积的溶剂冲洗进样管路。然后编辑方法,将运行程序设置为1分钟,进样体积为100ul,编辑序列设置多次连续进样,这样就能充分用空白溶剂冲洗进样系统了。在序列运行完毕后,恢复至初始运行方法,走了一针空白溶剂,发现果然有效,原先的残留清除殆尽,顽固残留问题也就迎刃而解了。

总结:在平常样品分析过程中,如果遇到样品浓度较高或者基质比较复杂的样品,我们一定要在运行之后设置足够的冲洗程序来将可能的残留冲走。就像我上面提到的,可以设置一个空白洗针程序,设置大的进样体积,在样品序列后面走几针,这样可以有效避免残留污染问题,同时也能提高色谱柱的寿命。
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Ins_194b59f7
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你好,没看明白100ul是怎么用的?
是修改洗针的体积还是多编辑一个测试方法,进样用空白溶剂,进样量100ul?
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原文由 Ins_194b59f7(Ins_194b59f7) 发表:你好,没看明白100ul是怎么用的?是修改洗针的体积还是多编辑一个测试方法,进样用空白溶剂,进样量100ul?
多编辑一个采集方法,程序设个两三分钟,把进样体积改为100ul,这个100ul只针对安捷伦1260仪器,其它仪器进样体积上限可能不一样,然后在进样小瓶内装入空白溶剂,就当运行样品序列
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Ins_2afdcd94
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1329进样器的话,默认定量环是100微升,还可以换环,大体积进样
通标小菜鸟
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原文由 Ins_2afdcd94(Ins_2afdcd94) 发表:1329进样器的话,默认定量环是100微升,还可以换环,大体积进样
100ul多进几次也一样,而且也没有备其它体积的进样环
memory光阴
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感谢楼主分享,给我们日常分析过程中残留排查提供了一个大致的思路,不过平常分析高浓度样品的时候还是要谨慎一点
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原文由 memory光阴(Ins_91d3b22d) 发表:感谢楼主分享,给我们日常分析过程中残留排查提供了一个大致的思路,不过平常分析高浓度样品的时候还是要谨慎一点
是的,平常多注意冲洗,对于高浓度样品最好稀释或者减少进样量,这样可以降低仪器被污染的概率
Ins_baeeaeb7
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平常走样还可以设置洗针溶液,这样能保证进样后冲一下
油条豆浆
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Insp_41babaed
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