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液相色谱（LC）
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主题：【已应助】高效液相色谱分离氨基酸

浏览0 回复7 电梯直达
Ins_7a2aa99a
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发表于：2023/08/15 15:04:04 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
赖氨酸和叔丁氧羰基-赖氨酸，利用C18柱进行分离 但两者出峰时间几乎一致，流动相A是水，流动相B是甲醇和乙腈1：1混合 进行梯度洗脱，初始比例A90%,B10%,2min后，A60% B 40%，5min后A90%,B10%但无法将两者化合物分开。应该如何操作才能分开
推荐答案：通标小菜鸟回复于2023/08/15
建议楼主上传实际出峰图，优化之前实际出峰图，看一下分离度和保留时间，然后把优化过梯度洗脱的出峰图上传看一下，方便大家给出更切实的解决方案。
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通标小菜鸟
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2023/8/15 17:19:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议楼主上传实际出峰图，优化之前实际出峰图，看一下分离度和保留时间，然后把优化过梯度洗脱的出峰图上传看一下，方便大家给出更切实的解决方案。
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xiaolanzi5
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2023/8/15 17:32:03 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议您先用高比例水相等度走走这两个物质，看看能不能分开，如果能分开，再梯度优化。
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myoldid
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2023/8/15 17:33:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

两个赖氨酸的保留很类似，估计用普通的C18很难分离了，要不试试安捷伦的氨基酸专用柱吧。专用柱上赖氨酸在15min后，调整一下流动相，还有分开希望
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Insp_41babaed
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2023/8/17 16:48:22 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
太棒了，又学到了，常学常新
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sacifice
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2023/8/18 12:59:33 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
借楼请教做氨基酸的大佬，在线衍生的话稳定性好吗?是自己配置衍生化试剂还是直接买安捷伦的，有没有靠谱的文献参考。之前有尝试开发，但是感觉稳定性有问题。
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myoldid
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2023/8/18 14:08:41 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 sacifice(sacifice) 发表:借楼请教做氨基酸的大佬，在线衍生的话稳定性好吗?是自己配置衍生化试剂还是直接买安捷伦的，有没有靠谱的文献参考。之前有尝试开发，但是感觉稳定性有问题。
多年之前做过了，还是很稳定的，买的安捷伦试剂盒，价格偏高，而且开封后不能保存太久。现在用的氨基酸分析仪，用的柱后衍生，也是买的厂家配好的试剂。自己配也可以，就是耗费时间。
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sacifice
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2023/8/18 17:14:19 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 myoldid(v2963297) 发表:
多年之前做过了，还是很稳定的，买的安捷伦试剂盒，价格偏高，而且开封后不能保存太久。现在用的氨基酸分析仪，用的柱后衍生，也是买的厂家配好的试剂。自己配也可以，就是耗费时间。
请教您如果柱前衍生，需要配置低温的自动进样器系统吗？之前小小尝试了一下，C18柱子，自己配置的衍生化试剂做出来氨基酸峰面积明显一针比一针峰面积低，感觉是衍生化试剂分解了，其中有加什么防降解物质或者pH调配的窍门还没有时间没有仔细查资料去摸。
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