主题：【求助】沉降菌检测

沉降菌的检测相关知识

检测步骤

1、测试前培养皿表面必须严格消毒。

2、将已制备好的培养皿按照采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

3、静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。

4、全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温箱中培养。

5、采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）配制的培养皿经采样后，在30℃~35℃培养箱中培养，时间不少于2d，采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿经采样后，在20℃~25℃培养箱中培养，时间不少于5d。

6、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作对照培养。

菌落计数

1、用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。

2、若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时 ，仍以2个或2个以上菌落计数。

楼主，可以参考该操作指引《沉降菌检测标准操作规程》https://baijiahao.baidu.com/s?id=1760307274000271170&wfr=spider&for=pc
1 方法概述：
本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。


2 所用的仪器和设备
2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。

2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度进行校验。

2.3 培养皿一般采用Ф90mm?15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。

2.4 普通肉汤琼脂培养基的准备及灭菌见附件A

3 测试步骤
3.1 采样方法：将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基面暴露30分钟（静态），再将培养皿盖盖上后倒置。

3.2 培养
3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.2.2 在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

3.3 菌落计数
3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，看是否有遗漏。
3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4 注意事项
4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性，准确性。

4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

4.5 采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。

5 测试规则
5.1 沉降菌检测前，被检测洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。
5.1.2 沉降菌检测前，被检测洁净室（区）已经过消毒。
5.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.2 测试人员
5.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
5.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

5.3 测试时间
5.3.1 对单向流，测试应在净化空调系统运行不少于15min 后开始。
5.3.2 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

5.4 沉降菌计数
5.4.1 采样点数目及其布置

最少采样点数目如下表


在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数见下表


采样点的布置
工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。
可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。采样点位置的详细规则见附件B。
房间采样点超过10个点，每7天对所有采样点轮流监测一次。

5.5 记录：监测记录中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。

5.6 结果计算
5.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
5.6.2 平均菌落数的计算，见式（1）。


式（1）
式中：

m 平均菌落数；
m1 1号培养皿菌落数；
m2 2号培养皿菌落数；
mn n号培养皿菌落数；
N 培养皿总数。

5.7 结果评定标准：

静态：


注：表中各数值均为平均值。

5.7.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
5.7.2 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

6 附件
6.1 附件A：培养基的准备及灭菌
6.1.1 培养基的准备：培养基应购买国家认可的培养基。
6.1.2 培养基平皿的制备

6.1.2 6.1.2.1 将Ф90mm 的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或160℃干热灭菌2h。
6.1.2 6.1.2.2 将培养基加热熔化，冷至55℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。
6.1.2 6.1.2.3 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
6.1.2 6.1.2.4 注：制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

6.2 附件B：采样点布置
洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。