近年来磷脂类物质的分离分析方法发展迅速。高效液相色谱法（HPLC）结合质谱法（MS）成为了当今脂质种类鉴定和定量最重要的技术之一。例如，Siyam等开发并验证了HPLC-MS方法分离和定量了Visudyne脂质体配方中的磷脂和相应降解产物，该方法能够分离结构异构体，如PG 18:1–18:1与PG 18:0–18:2，以及分离PG立体异构体，例如PG 18:1-18:1顺式和PG 18:1-18:1反式。Visudyne的主要脂质降解产物包括溶血磷脂酰胆碱、少数饱和不饱和溶血磷脂酰甘油以及游离的脂肪酸，每种降解产物含量均小于磷脂总量的1%（w/w）。Sun等开发了超高压液相色谱－四极杆－飞行时间质谱法来分析人乳、牛奶和羊奶中的磷脂大类和分子种类，共鉴定出11个磷脂类，包含229种磷脂。赵等建立了HPLC-ELSD法，对水产品中5种磷脂进行定性和定量分析，并对方法的回收率及精密度进行了验证。结果表明，不同种类水产品中磷脂含量丰富，但其含量与组成各异，其中含量最高的磷脂均为磷脂酰胆碱，其次为磷脂酰乙醇胺（PE），其它3种磷脂即溶血磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇（PI）和鞘磷脂仅在部分样品中检出，且含量较少。

HPLC分离磷脂常用的固定相包括二醇柱、C18柱、氨基柱以及一些其它新型的固定相^{[12, 39-41]}。Liu等^[42]设计合成了一种新型离子液体键合硅球固定相PIL@SiO₂，其制备流程如图1所示。作者首先以三辛基膦和烯丙基溴化铵为原料，合成了磷基离子液体——三辛基（烯丙基）溴化膦（[P_888Allyl]Br），以[P₈₈₈_Allyl]Br为可聚合单体，通过点击化学反应进一步合成了固定相材料PIL@SiO₂，与商品化氨基柱SiO₂-NH₂相比，填充PIL@SiO₂色谱柱对于核苷/核酸碱基类、酰胺类、磺胺类和苯胺类多种小分子物质的分离选择性能更好。作者进一步将制备的色谱柱用于磷脂标准品的分离，结果显示可同时实现磷脂类和种的分离，并且成功应用于大豆卵磷脂胶囊提取物的分离。Liang等以十二醇和半胱氨酸为改性剂，设计合成了苯乙烯-马来酸酐共聚物衍生物色谱固定相Sil-SMA-amino acid，填充Sil-SMA-amino acid色谱柱对于亲水性和疏水性小分子物质均具有良好的分离效果，并且实现了胃癌细胞膜脂提取物中磷脂组分的分离与分析。李新庭等^[44]制备了Sil-VDI色谱固定相，其制备过程如图2所示。该固定相以离子液体—溴化1-乙烯基-3-十二烷基咪唑为单体，并通过点击反应接枝在硅球表面。填充Sil-VDI色谱柱可实现烷基苯、多环芳烃、苯胺和苯衍生物类疏水类小分子物质以及三种无机阴离子的分离，具有典型的反相/离子交换混合模式保留机制，并且成功用于肺癌细胞和鸡蛋黄磷脂样品提取物的分离分析。