主题:【已应助】LC-MS工作过程中积攒了一些问题,期望大佬帮忙解惑答疑!

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Sean Wang
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接触LC-MS两年左右,主要针对血液样本进行方法的开发,基本都是参考文献里操作,会发现很多方法开发和评价方式多种多样,究竟不同的选择背后有什么样的原因却不甚了解。2年来积攒了一些问题,希望可以得到大佬的解答!
Q1.选用相同的碎片作为离子对,理论情况下,相同浓度的内外标响应是否应是1:1的关系?内标是待测分析物的氘标或碳、氮同位素标记物。
Q2.在方法开发阶段确定了质控的靶值,后续进行样本检测时,偶尔会出现质控结果整体偏移的情况(如整体偏低10%等),若质控样本没有问题,出现这种情况的原因是什么?标液降解了?还有其他原因吗?这种情况下,是否可以根据质控的偏移情况,整体调整样本检测结果,比如质控整体偏低10%,则将结果整体调高10%?(非临床实验室)
Q3.若方法没有有证参考物质CRM进行方法正确度的评价,通常会采用加标回收的方式进行正确度评价。那么加标时使用的标准品是否应与用于方法校准的标准品不同?若相同,则会存在同一个标准物质既用于校准又用于质控的情况,这种方式是否适合用来评价正确度?
Q4.若使用了内标法,在配制方法的标准曲线样本时,什么时候应该用基质配制,什么时候用有机试剂或初始流动相就可以?用基质配制标准曲线样本,考虑的因素是什么?仅用于校正基质效应吗?使用内标时,是否就可以不用基质配制标准曲线了?
推荐答案:hujiangtao回复于2024/02/01
Q1:同位素内标和待测物结构几乎相同,但也不是完全相同,同一浓度响应值略有差异也正常

Q2:质控整体偏移可能和前处理过程有关,如果偏移稳定可以用回收率校正结果

Q3:正确度一般通过回收率体现,计算回收率的方式就是在样品中加入多少然后前处理最终检测出多少进行比较,应该用同一标准物质啊

Q4:用基质匹配标曲就是为了校正基质效应,同位素内标法由于内标和待测物结构基本一致基质影响也一致,所以同位素内标法用溶剂标曲就可以
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hujiangtao
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Q1:同位素内标和待测物结构几乎相同,但也不是完全相同,同一浓度响应值略有差异也正常

Q2:质控整体偏移可能和前处理过程有关,如果偏移稳定可以用回收率校正结果

Q3:正确度一般通过回收率体现,计算回收率的方式就是在样品中加入多少然后前处理最终检测出多少进行比较,应该用同一标准物质啊

Q4:用基质匹配标曲就是为了校正基质效应,同位素内标法由于内标和待测物结构基本一致基质影响也一致,所以同位素内标法用溶剂标曲就可以
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2024/2/1 10:16:09 Last edit by hujiangtao
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Q1.选用相同的碎片作为离子对,理论情况下,相同浓度的内外标响应是否应是1:1的关系?内标是待测分析物的氘标或碳、氮同位素标记物。-----------------------------------------------------------------------绝大部分同位素内标和外表响应是一样,但是遇到过响应不一样的,差异也不是很大。
Q2.在方法开发阶段确定了质控的靶值,后续进行样本检测时,偶尔会出现质控结果整体偏移的情况(如整体偏低10%等),若质控样本没有问题,出现这种情况的原因是什么?标液降解了?还有其他原因吗?这种情况下,是否可以根据质控的偏移情况,整体调整样本检测结果,比如质控整体偏低10%,则将结果整体调高10%?(非临床实验室)---------------------------------------------------第一,不太清楚你那边的质控是怎么做的哈,一般情况是质控偏离在接受范围内,可以不调整,直接报告结果;如果质控偏离接受范围,需要重新处理实验。第二,质控整体偏低或偏高情况有很多,不限于你说的标液降解,例如基质效应、质谱变脏,系统污染、甚至进样器故障偏、实验人员失误离等都会导致整体偏离。
Q3.若方法没有有证参考物质CRM进行方法正确度的评价,通常会采用加标回收的方式进行正确度评价。那么加标时使用的标准品是否应与用于方法校准的标准品不同?若相同,则会存在同一个标准物质既用于校准又用于质控的情况,这种方式是否适合用来评价正确度?----------------------------------------------------------------------可以选用同一批标液不同瓶做
Q4.若使用了内标法,在配制方法的标准曲线样本时,什么时候应该用基质配制,什么时候用有机试剂或初始流动相就可以?用基质配制标准曲线样本,考虑的因素是什么?仅用于校正基质效应吗?使用内标时,是否就可以不用基质配制标准曲线了?-------------------------------------------------第一,一般是基质影响强的时候使用内标法,配置标曲的时候也是要看基质影响情况,能方便找到blank基质用基质标肯定是优的选择。第二,内标主要就是消除基质效应和MS响应不稳定性
Sean Wang
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原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
Q1:同位素内标和待测物结构几乎相同,但也不是完全相同,同一浓度响应值略有差异也正常

Q2:质控整体偏移可能和前处理过程有关,如果偏移稳定可以用回收率校正结果

Q3:正确度一般通过回收率体现,计算回收率的方式就是在样品中加入多少然后前处理最终检测出多少进行比较,应该用同一标准物质啊

Q4:用基质匹配标曲就是为了校正基质效应,同位素内标法由于内标和待测物结构基本一致基质影响也一致,所以同位素内标法用溶剂标曲就可以
感谢大佬应助!其他问题的答案我没有疑议了。但针对问题3,我还有几点疑问:①若标准物质不是有证参考物质,其纯度或标定值的正确性可能不同,那么不同标准物质校准的方法检测的样本的结果之间肯定存在差异,但这两种校准品各自做自己的加标回收又是没有问题的,这时可以说方法的正确度是没有问题的吗?②加标样本和基质样本有时存在很大的基质差异,比如分析物在天然样本中是与其他物质结合的状态存在的情况时,与加标物质在样本中的存在形式(游离态或少量结合)会存在很大的不同,即使方法的加标回收可以通过,但未必可以证明检测基质样本时的结果也是没有问题的,这时用加标回收评价正确度便会有一定的问题吧?
Sean Wang
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原文由 歌名(Ins_eedcdc41) 发表:
Q1.选用相同的碎片作为离子对,理论情况下,相同浓度的内外标响应是否应是1:1的关系?内标是待测分析物的氘标或碳、氮同位素标记物。-----------------------------------------------------------------------绝大部分同位素内标和外表响应是一样,但是遇到过响应不一样的,差异也不是很大。
Q2.在方法开发阶段确定了质控的靶值,后续进行样本检测时,偶尔会出现质控结果整体偏移的情况(如整体偏低10%等),若质控样本没有问题,出现这种情况的原因是什么?标液降解了?还有其他原因吗?这种情况下,是否可以根据质控的偏移情况,整体调整样本检测结果,比如质控整体偏低10%,则将结果整体调高10%?(非临床实验室)---------------------------------------------------第一,不太清楚你那边的质控是怎么做的哈,一般情况是质控偏离在接受范围内,可以不调整,直接报告结果;如果质控偏离接受范围,需要重新处理实验。第二,质控整体偏低或偏高情况有很多,不限于你说的标液降解,例如基质效应、质谱变脏,系统污染、甚至进样器故障偏、实验人员失误离等都会导致整体偏离。
Q3.若方法没有有证参考物质CRM进行方法正确度的评价,通常会采用加标回收的方式进行正确度评价。那么加标时使用的标准品是否应与用于方法校准的标准品不同?若相同,则会存在同一个标准物质既用于校准又用于质控的情况,这种方式是否适合用来评价正确度?----------------------------------------------------------------------可以选用同一批标液不同瓶做
Q4.若使用了内标法,在配制方法的标准曲线样本时,什么时候应该用基质配制,什么时候用有机试剂或初始流动相就可以?用基质配制标准曲线样本,考虑的因素是什么?仅用于校正基质效应吗?使用内标时,是否就可以不用基质配制标准曲线了?-------------------------------------------------第一,一般是基质影响强的时候使用内标法,配置标曲的时候也是要看基质影响情况,能方便找到blank基质用基质标肯定是优的选择。第二,内标主要就是消除基质效应和MS响应不稳定性
谢谢解答!
Ins_d0faf51a
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第一个问题需要注意以下影响:理论上 采用碎裂方式相同的 MRM,同位素取代内标的响应和未取代待测物 有可能 不一样……这种情况是:碎裂过程中发生了重排,特别是 氢原子,在大部分碎裂中都有氢重排;如果采用的是 氘代内标,是有可能 出现:一部分产物离子重排移动位置的是氢、另一部份是氘,这时候 即使碎裂模式一样的MRM,氘代内标的强度也比未取代待测物弱,比值理论上是整数,取决于重排的原子数
zzy19810115
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