原文由 通标小菜鸟(v3141805) 发表:
楼主参考一下这篇文献,有可能是你的衍生化过程出了问题,也有可能是LCMS仪器参数设置不合适。
《超快速液相色谱-串联质谱法检测人血清中雌酮、雌二醇及雌三醇的方法学研究 》
建立灵敏、可靠、稳定的柱前衍生化超快速液相色谱-串联质谱(ultra‐fast liquid chromatography‐mass spectrometry , U FLC‐M S/M S )方法检测人血清中超微量雌酮、雌二醇和雌三醇。方法:取200μL血清样品,采用两步液萃取法,通过丹磺酰氯衍生化后进行样品分析,以雌二醇‐d3作为内标。采用Welch Ultimate UHPLC XB‐C18色谱柱(2.1 mm ?50 mm ,1.8μm),乙腈-水(含0.1%甲酸)为流动相,梯度洗脱,流速0.20 mL/min ,柱温40℃,进样量10μL。在电喷雾离子(electrospray ioniza‐tion ,ESI)源正离子模式下,选择多反应监测(multiple reaction monitoring ,MRM )模式。经检测,雌酮、雌二醇、雌三醇及内标的检测离子对分别为:m/z为504.0→171.0、m/z为506.0→171.0、m/z为522.0→171.0和 m/z为509.0→171.0。结果:丹磺酰氯衍生法可大幅度提高雌酮、雌二醇、雌三醇在ES I源下的离子化效率,血清中3种成分的线性范围均为0.01~5.00μg/L ,定量下限均达到10 ng/L ,样品回收率50%以上,批内、批间准确度与精密度均小于15%,满足生物样品的分析要求。结论:该方法灵敏度高、重现性好,可以用于临床血清样品中雌激素水平的定量分析。
看了,文章上除了衍生后萃取的步骤,都是一样的,有的文献是衍生化后直接上样,下午试试衍生后萃取