实验员做方法时发现,混标稀释配制而成的系列标准溶液上机后,氟苯尼考不成线性
原以为是响应值的问题,没太在意,让人调节一下流动相中甲酸铵浓度试一下,结果仍然不成线性,如下图:
于是我去机器工作站看情况,发现次响应值其实并不高,甚至挺低的(因为摸索过程中过分改变了甲酸铵的浓度),那么不成线性的原因是什么呢?
分析标准曲线涉及的各个数据时,发现如果不选内标法,氟苯尼考本身线性良好,同时发现,氟苯尼考-D3浓度升高,与之前拟合的氟苯尼考呈相反的趋势
所以可以推测,是氟苯尼考-D3收到了干扰,导致了这个异常结果!
色谱图上看,氟苯尼考胺和氯霉素都分开了,保留时间对不上,不会是二者或二者的氘代内标影响,氟苯尼考本身线性良好、氯霉素线性也良好说明更不是配制溶液等操作问题,那么就剩下一个可能。。
氟苯尼考影响了氟苯尼考-D3。。(皇后杀了皇后?
)
氟苯尼考化学式C12H14Cl2FNO4S,那有可能是因为化合物含有Cl元素且同位素内标选择不合理导致的,即外标物同位素与内标物质量数发生重叠。
然后我查到了下图
氟苯尼考[M-H]-离子的基峰为356.0,由于天然同位素的存在,因此氟苯尼考出现了358.0、359.0、360.0、361.0的离子峰
好死不死,标准中规定的内标离子对是359.2>339.0
配制只有内标的溶液上机进样测定发现,峰面积是稳定的,当配制同浓度的氟苯尼考和氟苯尼考-D3,氟苯尼考-D3峰面积增大约17%
到此,已经可以确定,随着目标物浓度的不断提高,内标的响应也会随之增大,内标法无法拟合线性也就可以解释了。
【解决方案1-换更多氘的同位素内标】
答:失败,市售好买的只有氟苯尼考-D3
【解决方案2-换不受影响的内标离子通道】
答:成功!经测试,将氟苯尼考-D3的MRM方法变更为361.0>341.0,线性有了质的提升,虽然还差一点,但是只需要再调节一些条件,即可满足。
没有选择362.1,是因为丰度确实有点太低了,担心影响响应值,但是应该也可以跑的出来,线性应该更好的多,有空时候再试试。
再就是对氟苯尼考和
氟苯尼考-D3做子离子扫描,找一个新的不受氟苯尼考影响的子离子。【解决方案3-在方案2的基础上,适当增大标准曲线溶液中和测试样品中的内标浓度】
答:未进行测试,理论上就是进一步稀释氟苯尼考361.0同位素的影响,线性肯定会更好的。有空时候再试试。