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液相色谱（LC）
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主题：【原创】【我们不一YOUNG】+液相分析中如何进行方法开发的流程分享

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发表于：2024/07/24 08:39:09 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我们要开发一个液相色谱方法的话，往往是因为原方法分离效果差；或者没人做过，查不到具体方法；再或者是未知化合物的方法开发。我们今天就介绍一下液相色谱的方法开发流程。
我们就以未知化合物为例。
分离模式的选择我们先测试样品的溶解性：如果在烷烃试剂中溶解性好，那么可首选正相模式开发方法，色谱柱主要以硅胶柱为主，流动相可以选择正己烷-乙醇、二氯甲烷-甲醇；如果在二氯甲烷或乙醇中溶解性好，那么可以选用正相模式，或者反相模式中的纯有机模式，色谱柱可以用硅胶柱、C18或C8，反相的流动相可以用甲醇-乙腈、乙腈-二氯甲烷。
如果在水、甲醇或乙腈中溶解性好，那么可以选用反相模式、Hilic模式或离子交换模式，反相流动相可以用水-甲醇、水-乙腈，HILIC的流动相可以用乙腈-水，离子交换流动相可以用缓冲盐浓度梯度洗脱、或pH的梯度洗脱。
如果是分析酸性化合物，我们选择流动相的pH应低于其pKa至少2个pH单位；如果是分析碱性化合物，流动相的pH应高于其pKa至少2个pH单位。
确定待测物结构上是否有紫外强吸收化学键，可以用DAD检测器看一下紫外吸收强度范围，选取合适的分析波长；如果结构上没有双键，则不能用紫外检测器，可以考虑示差折光检测器（RI）；如果待测物沸点较高（大于400℃），则可以选择蒸发光散射检测器（ELSD）或电喷雾检测器（CAD）；如果需要确定分子量，可以连接质谱检测器。
我们可以先跑一个大梯度，比如反相用水和乙腈流动相，可以用乙腈的比例从5%逐渐增至95%，根据出峰情况，再去优化放缓梯度。

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