1、实验背景

目前实验室分析正磷采用国标分析方法GB/T 6913-2008，需要配制钼酸铵溶液及抗坏血酸溶液，配制钼酸铵溶液需要用到浓硫酸，危险性较高，且分析时间较久，大概需要20min,而哈希分析法分析时间10min，不需要配制试剂，减少了配制试剂的风险。

2、分光光度计法（抗坏血酸法）测定原理及分析步骤

国标法分析原理：在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵溶液反应生成黄色的磷钼盐锑络合物，再用抗坏血酸还原成磷钼蓝，于710nm最大吸收波长处用分光光度法测定。

测定方法：（1）移取5mL样品于50mL容量瓶中，同等条件做空白实验

（2）分别移取2ml钼酸盐溶液至空白和样品容量瓶中，摇匀。

（3）分别移取1mL抗坏血酸溶液至空白和样品容量瓶中定容至50mL,摇匀。

（4）室温下放置10min，显色。在710nm进行测定。

3、哈希法（抗坏血酸法）分析原理及步骤

原理：在酸性条件下，正磷酸盐与钼酸铵溶液反应，生成磷酸盐-钼酸盐的复合物。该复合物与抗坏血酸反应，生成颜色强烈的钼蓝复合物。测定结果在波长880nm的光波下读取。

测定：（1）选择测定程序 490 活化磷

（2）向比色皿加入10mL样品

（3）加入磷酸盐试剂粉枕包，立即盖上盖子，上下摇晃30s，混匀。

（4）启动仪器计时器，计时反应2分钟

（5）空白样准备：向另一比色皿中加入10mL样品

（6）反应到时后进行空白测定，按下“Zero(零)”键进行仪器调零。

（7）擦拭准备好的样品管外壁，将其插入样品池中，按“Read（读数）”键读取结果，单位mg/L PO₄^3-

4、可行性分析

a）方法原理

两种分析方法的原理相同，都是抗坏血酸法

b）可行性

两种方法分析原理相同，只是测定波长不一样，由以下实验反应两种方法无差异性。

5、分光光度法与哈希法异同点

表1：分光光度法与哈希法异同点

异同点	分光光度法	哈希法	优缺点
测定范围	0.05-20mg/L PO₄^3-	0.02-2.5mg/L PO₄^3-	哈希法检出限比国标法低，灵敏度更高
测定波长	710nm	880nm	哈希法参考标准为美国环境标准
试剂	100g/L抗坏血酸 26g/L 钼酸铵	试剂粉枕包	哈希法不需要配制剂，国标法配制钼酸铵需要用到浓硫酸，风险较高
时间	20min	10min	哈希法时间较短

6、哈希法曲线验证

表2：哈希法曲线验证数据统计表

哈希法标准验证
标准点mg/L PO₄^3-	测量值 mg/L PO₄^3-	回收率 %
1.94	2.03	104.64
0.97	1.04	107.22
0.39	0.41	105.13
0.19	0.20	105.26

经验证回收率均在90%-110%之间，哈希分析方法曲线可以使用

7、实验结果

选择20个样品进行方法实验，根据方法分析结果进行统计分析，推断方法分析结果是否可行。实验数据如下表：

表3：方法比对数据统计表

序号	分光光度法mg/L （0.05-20）	哈希法mg/L （0.02-2.5）	极差	备注
1	7.0	6.7	0.3	哈希法稀释10倍
2	14.0	13.1	0.9	哈希法稀释10倍
3	9.0	8.2	0.8	哈希法稀释10倍
4	18.0	18.5	-0.5	哈希法稀释10倍
5	30.0	29.2	0.8	哈希法稀释20倍分光法稀释5倍
6	4.0	3.8	0.2	哈希法稀释10倍
7	7.0	6.05	0.95	哈希法稀释5倍
8	12.0	11.2	0.8	哈希法稀释10倍
9	8.0	6.9	1.1	哈希法稀释10倍
10	12.0	12.9	-0.9	哈希法稀释10倍
11	10.0	9.8	0.2	哈希法稀释10倍
12	13.0	13.5	-0.5	哈希法稀释10倍
13	9.0	7.8	1.2	哈希法稀释10倍
14	8.0	7.2	0.8	哈希法稀释10倍
15	20.0	20.1	-0.1	哈希法稀释10倍
16	1.0	1.16	-0.16	哈希法稀释10倍
17	1.0	1.3	-0.3	哈希法稀释10倍
18	13.0	13.6	-0.6	哈希法稀释10倍
19	22.0	23.2	-1.2	哈希法稀释10倍
20	11.0	10.9	0.1	哈希法稀释10倍

8、统计分析

图1：方法比对t检验诊断报告

图2：方法比对t检验汇总报告

图3：方法间极差正态分布表

对分光光度法（国标法）与哈希法测定正磷两种方法极差进行双样本t检验和极差的正态分布分析，P值为0.234，大于0.05，说明数据呈正态分布，数据是可靠的，由图二可知P值为0.926，大于0.05，说明两种测量方法没有显著差异，哈希法测定正磷是可用的。

9、结论

由统计分析可以得出结论：该方法T检验评定符合要求，故可以采用哈希法进行分析实验。