?质谱半定量的基本步骤?
?半定量引物的设计?:设计引物时,产物的长度最好保持在250-700 bp,以便在电泳中与引物二聚体区分开。拿到引物后,需要进行?PCR验证引物的特异性并摸索退火温度。
?提?RNA并反转录?:提取RNA并进行反转录,同时验证cDNA模板是否可用。确定内参基因的平台期?:通过PCR扩增确定产物不再增加时的循环数,即平台期。
?质量定量分析?:
使用目标离子的碎片进行定量,特征性强,排除干扰。
提高扫描速率,提高准确率和重复性。
通过色谱柱分离后定量分析,避免竞争性离子的影响。