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液相色谱柱在使用前需要进行活化处理,以确保其性能和寿命。以下是具体的处理步骤:
- ?反相C18柱的活化?:使用甲醇或乙腈冲洗20~30个柱体积,然后用甲醇/乙腈:水(50:50)冲洗10个柱体积,最后用流动相平衡10~30个柱体积。?
- ?正相色谱柱的活化?:用流动相平衡20~30个柱体积。?
- ?离子色谱柱(如SAX、SCX)的活化?:先用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积,然后转换到流动相平衡。
- ?氨基柱和氰基柱的活化?:这些柱子通常保存在正相流动相中,用于反相色谱时,先用异丙醇或乙醇冲洗50~100个柱体积。对于HILIC模式,用50倍柱体积的50/50乙腈/水活化平衡,然后再用流动相平衡20个柱体积。
此外,活化过程中应注意以下几点:
- ?避免污染?:在活化过程中,不要将柱子接在检测器上,以避免不必要的污染。
- ?平衡色谱柱?:确保使用流动相与保存液互溶,并每天用足够的时间来平衡色谱柱,这样可以延长柱子的使用寿命。
- ?冲洗和保护?:在分析开始前用纯水冲洗30分钟以上,再用缓冲盐流动相平衡;分析结束后,先用纯水冲洗30分钟以上,再用甲醇冲洗30分钟来保护柱子。?