主题：【求助】SOD测定时 光照反应颜色如何控制啊！

真的这么牛么？怎么没有听说呢！

SOD检测试剂盒！(A001)
发布日期:2006-03-20

一：产品简介：
1 、测定意义：超氧化物歧化酶（ SOD ）对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，此酶能清除超氧阴离子自由基（ O 2 － · ）保护细胞免受损伤。
2、测定原理：通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子自由基（ O 2 － · ） , 后者氧化羟胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用可见光分光光度计测其吸光度。当被测样品中含 SOD 时，则对超氧阴离子自由基有专一性的抑制作用，使形成的亚硝酸盐减少，比色时测定管的吸光度值低于对照管的吸光度值，通过公式计算可求出被测样品中的 SOD 活力。高等动物细胞内只有二种 SOD 即铜锌 - SOD （ Cu Zn -SOD ）与锰 - SOD(Mn-SOD), 二者相加等于总 SOD(T-SOD) 。采用研制的抽提法处理后的样本， Mn-SOD 活力丧失，而 CuZn-SOD 活力不变，再用 T-SOD 活力减去 CuZn-SOD 活力，即为 Mn-SOD 活力。

3、 简便快速：整个操作过程约 50 分钟，在这期间可测 100 例以上样本。这种短时间测定大批量样本的测试方法，很受广大科研人员的欢迎。

4、 取样量极微：本法取手指或耳垂等末梢血 20 μl ～ 50 μl 即可测红细胞中的 SOD ，只需 2ml 静脉血可测白细胞中的 SOD 及血小板中 SOD ，只需 6mg 组织就可测组织匀浆、胞浆、 0.2g 组织可测线粒体及微粒体中的 SOD 。

5、灵敏度高： ID50=0.05g/ml 是邻苯三酚法灵敏度的 18 倍，因而可测定实验用动物的心肌灌流液、脑脊液、胸腹水、肾透析液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞中的 SOD ，此法最灵敏。

6、稳定性好：试剂放在 0°C ～ 4°C 冰箱中可保存 6 个月。

7、再现性好：变异系数 CV=1.7% ，同一份标本这次测得结果与几天后测得结果相差无几。

8、回收试验： X + SD=103.3 + 2.63%

9、测试面广：即可测 T-SOD 又可测 Mn-SOD 也可测 CuZn-SOD ，本法测试过实验动物的红细胞、白细胞、血小板、血清（浆）、心肌组织、肺、肝、肾、脾、耳膜、肾上腺等几十种组织匀浆、线粒体、微粒体、离体心肌灌流液、肾透析液、腹水、胸水、脑脊液、心肌培养细胞、肿瘤培养细胞等，效果均很佳。

10、方法更先进、技术更成熟：已研制出 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 和 KCN 抑制 CuZn － SOD 法测定 Mn － SOD 的基础上，开发出抽提法测定 CuZn － SOD ，该法不仅无毒无味，而且较 SDS+KCl 抑制法测 CuZn － SOD 更简便 、 更快捷。通过抽提法测定 CuZn － SOD ，同时测定 T － SOD ，即可计算出 Mn － SOD 活力。

11、质优价廉：本试剂盒主要原料为美国进口，但价格与国内邻苯三酚测定法相近。

12、实验仪器简单：所用的 37 ℃恒温水浴锅 、 550nm 处的分光光度计、低速台式离心机、微量移液器等主要实验设备均为实验室常用设备，无需特殊设备。用简单的实验设备测定出高水平的指标。

13 、适用范围广：本试剂盒不仅可以在普通分光光度计上操作，还可以在半自动、全自动生化分析仪、酶标仪上等先进仪器上操作。

14 、说明书简洁、详细，易读易懂，试剂配制简单，实验操作简便易行，操作人员无需专门培训，只需按照说明书要求操作，即可获得理想的实验结果。

15 、此方法经江苏省卫生厅组织的同行专家鉴定，并获卫生厅科技成果一等奖。此专利已由中国、美国、英国等国家专利刊收集。文章发表于南京铁道医学院学报 1991 年 3 月第十卷第一期 27 — 30 页，作者：季建平。


二 、 试剂盒组成：
试剂名称 包装 100T 50T

试剂一： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂二： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂三： 液体 10ml × 1 液体 10ml × 5

试剂四： 液体 350 m l × 2 液体 350 m l × 1

试剂四： 稀释液 5ml × 2 稀释液 5ml × 1

试剂五： 粉剂×1 粉剂×1

试剂六： 粉剂×1 粉剂×1

三 、 反应参数：

反应温度 37 ℃
反应时间 40 分钟
测定波长 550nm
比色光径 1cm 光径玻璃比色皿
四 、 保存条件：
在 4 ℃的保存条件下，可以稳定 6 个月（注意：试剂四不可以冷冻）

3楼的方法只是作为例子，你的反应温度是多少？

我是按照一般的生理实验指导书上面的方法做的,氮蓝四唑法测定,温度要求是25-35度之间,就是样品的变色时间不一,就不知道是否要终止先变色的样品.如果把所有样品的反应色控制在一个程度,所测出的值会不会都是差不多一样的?我准备做个对比实验试试看怎样.

原文由 lxx5052 发表:
我是按照一般的生理实验指导书上面的方法做的,氮蓝四唑法测定,温度要求是25-35度之间,就是样品的变色时间不一,就不知道是否要终止先变色的样品.如果把所有样品的反应色控制在一个程度,所测出的值会不会都是差不多一样的?我准备做个对比实验试试看怎样.

酶促反应都是有时间、温度、底物浓度要求的。最好用恒温空气浴定时反应，到时终止反应，变色时间不同表明SOD含量不同吧。

非常感谢了！

原文由 lxx5052 发表:
非常感谢了！

不客气，欢迎常来，并与大家交流你的经验。

我也做过这个实验,正常来说应该是刚变色就行的了

原文由 mailson 发表:
我也做过这个实验,正常来说应该是刚变色就行的了

我觉得也应该是刚变色就可以了，按照实验原理所说。可同时好多个样一起照光，有的它就后变色，要是把反应时间控制一致的话，那先变色的不就越来越深了？测得的酶活性也就降低了啊。

我认为还是用邻苯三酚自氧化法可靠些或者试剂盒