主题:【讨论】关于Western实验的问题

浏览0 回复5 电梯直达
zhangruliang
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zhangruliang
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原文由 lxdongzi2003 发表:
做WB实验选择缓冲液是要看目的蛋白的等电点。
对于碱性蛋白,在做电转时,不能使用tris-甲醇体系,而要用tris-SDS体系,就是与电泳体系一致的方法去转移。同时最好用尼龙膜去结合蛋白。
否则,在甲醇的作用下,原来与蛋白质结合的SDS均脱离开蛋白质,而不再带正电,就很难在电场下运动。

这个方法倒没有试过,不过还有个问题,大家应该知道,检测蛋白N端的时候,若样品无法精纯(85%以下),则只能通过转膜,且只能是PVDF膜,而且缓冲液中,不能含有氨基酸物质(就是tris不能用),若这样的话就是判定碱性蛋白不能做N端?绝望...........
jishuang43
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原文由 jishuang43 发表:
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