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主题：求助：关于人体血清中蛋白质的去除方法？？？

浏览0 回复27 电梯直达
jervis36
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发表于：2006/03/31 21:52:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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我是个液相的新手，接触不到半年，以前是学习临床的，因为工作的原因，所以现在改作液相，这两天在作血清的时候遇到了好大的麻烦，就是需要测定的成分（水溶性的）的保留时间点上始终有个特别大的蛋白质，改了好多次的流动相及血清都经过几个预处理，那些个讨厌的家伙始终如一的在那儿（保留时间随着流动相改变而变，始终在我需要测定的成分周围出现，而且峰面积特别的大，还有其他的地方也有好多的蛋白质峰，每次进样前我都用0.2微米的一次性过滤器过滤后再进的样，流动相是甲醇/甲醇（10%）：乙酸（0.5%）水溶液（89.5%）=0-25/100-75（梯度在30min变化，梯度曲线为6，柱子为迪马公司的C18 150*4.6钻石柱子）监测器为waters 2996 进样器为waters 2995    我的邮箱是jervis36@163.com或者电话028--89192580，QQ250116810谢谢各位高手了啊！！！ 
推荐答案：Easy-Boy回复于2006/04/03


同意这种说法，离心也是去除蛋白质的一种好方法。
补充答案：

guanzm1997回复于2006/04/04

第一，你说的杂质峰可能是色谱条件的问题，如果不走梯度的话试试。还有干扰的话，你就试试SPE柱。如果还有干扰，就不是蛋白的原因，你就采取反提的办法。这个干扰峰有可能是内源性杂质而非蛋白。

mhp77回复于2006/04/06

我也觉得不一定是蛋白的事。

没谱回复于2006/04/07

用的什么检测器？看看杂质光谱图先确定是什么物质吧

东方王回复于2006/04/01

楼主已经试过几种前处理血清的方法，是哪几种啊？

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2006/3/31 23:15:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以用乙腈沉淀蛋白。可以用1：2的比例，当然乙腈越多越好，沉淀的会越完全。其实最好液液萃取，但你的成分是水溶性的。所以沉淀蛋白吧。
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东方王
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2006/4/1 8:52:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主已经试过几种前处理血清的方法，是哪几种啊？
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2006/4/3 8:16:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用液液萃取，用二氯甲烷萃去杂质。或者沉淀蛋白质。
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Last edit by easyboy
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2006/4/3 12:14:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
比较彻底的是使用超高速离心机，直接祛除蛋白质。
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2006/4/3 12:34:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 who1235 发表:
比较彻底的是使用超高速离心机，直接祛除蛋白质。


同意这种说法，离心也是去除蛋白质的一种好方法。
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没谱
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2006/4/3 13:34:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不知道帖主的主成分和杂质蛋白分子量相差多大，可以考虑用超滤的方法。
如果只是检测，可以使用一次性超滤离心管，在普通离心机即可使用。
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jervis36
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2006/4/3 20:03:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
试过了，用的是1：3的倍数，还用过甲醇，都没有达到预期目的，而且每次我都用了8500r/min的离心机离心了30min的，thanks ！
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2006/4/3 20:08:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我还用过水浴法，水浴后再加甲醇或则已腈沉淀得方法，每种方法后都是高速离心后取得上清液再用0.2um的过滤器过滤后进的样，还是不行啊！555555
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阿峰
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2006/4/4 8:44:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用GPC，或简单柱层析试一试。
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杰斐逊
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2006/4/4 9:22:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
离心机的转数高一些试试,14000rpm怎么样
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手机版： 求助：关于人体血清中蛋白质的去除方法？？？
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