中国卫生检验杂志2OO4年2月第l4卷第1期Chinese Journal of Health I~boratory Technology 2OO4.Februa~.14.No.1
[文章编号]1004-8685(2004)01—59.02
[中图分类号]R155.5 1
RP—HPLC法测定染色黄鱼中的碱性橙含量
铁晓威,黄百芬,任一平
(浙江省疾病预防控制中心,杭州310009)
[文献标识码]A
碱性橙(Basic Orange 1I)是一种偶氮类碱性染料,俗名”王
金黄”,主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色。根据美
国卫生研究所(NIH)化学品健康与安全数据库资料表明:摄
取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤
害 一。有确凿的动物实验数据表明,该物质为致癌物 ,在接
触该物质时需使用无孔手套和呼吸面罩,以免对人体造成伤
害。根据《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准》(GB
2760)及《中华人民共和国食品卫生法》的相关规定,为禁止用
作食品添加剂的化学制品。由于碱性橙比其它水溶性染料如
柠檬黄、日落黄等更易于在鲜海鱼上染色且不易褪色,因此一
些不法商贩用碱性橙对黄鱼进行染色,以次充好,以假冒真。
欺骗损害消费者,危害消费者的身体健康。
目前国内尚无成熟的测定食品中碱性橙残留的方法,作
者建立了RP—HPLC法测定染色黄鱼中碱性橙残留的方法,取
得了满意的效果。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂美国BECKMAN SYSTEM GOLJ)高效
液相色
谱仪(126高压溶剂泵,166紫外一可见光检测器,508自动进样
器),32Karat色谱工作站,均质机,旋转蒸发仪,超声波振荡器,
离心机,碱性橙标样购自美国Sigma公司,甲醇为色谱纯,水为
重蒸水,其它试剂均为分析纯。
1.2 色谱条件色谱柱:汉邦Lichrospher C18(dp5 4.6tumiD
×150n~);流动相:甲醇一20mmol/L乙酸铵(印:40);流速:
1.0ml/min;检测波长449nm,柱温:室温,进样量:2oeJ。
1.3 测定步骤按GB将黄鱼样品去骨去内脏,用均质机均
59
【测定方法】
质,准确称取均质后样品20.00g于200ml烧杯中,加入20g无
水硫酸钠搅拌均匀,加入50Tnl无水乙醇超声波提取15min,用
50ml无水乙醇再提取一次,合并两次的提取液,过无水硫酸钠
柱脱水。于70~C真空浓缩至干,加入1.0ml水,混匀后移入离
心管中20000r/min离心5Inin,取下层水相经0.45t~n的膜过滤
后进样分析。
2 结果与讨论
2.1 吸收波长的选择取适量标样用无水乙醇制成20t,g/ml
的溶液,在190nm一600Bin的波长范围内进行扫描,结果碱性
橙kmax=449nm(图1)。
2.2 流动相的选择
2.2.1 甲醇含量对保留时间的影响 用20mmol/L乙酸铵和
甲醇按一定比例?昆合考察不同配比对保留时间的影响(图2)。
2.1.2 流动相pH对保留时间的影响 固定甲醇比例为60%
(v/v)用乙酸和1M的氢氧化钠调节20mmol/L乙酸铵的pH
值,考察不同流动相pH对保留时间的影响(图3)。
2.2 标准曲线绘制准确称取碱性橙标样0.1000g用无水乙
醇溶解并定容到100m],分别量取此液(碱性橙浓度为1.0me/
ITI)适量,用无水乙醇稀释成浓度分别为0.39、0.78、1.56、3.12、
6.25、12.50、25.00、50.00、100.00,~/ml的溶液,分别进样20 ,
记录色谱图和峰面积,以峰面积为横坐标,以碱性橙浓度为纵
坐标作图(图4)。
得线性方程为:Y=1.38646×10—5X+0.00694053,r=0.
9999
{.}_{·}_{·}_{·}_{·}_{·}_{·}{·}_{·}_{·卜{·}{·}_{·}_{·}{·}{·}_{·}_{·}{·}_{·}_{·}_{·}{·}{·}_{·}{·}{·}_{·}_{·}{·}{·}_{·}{·}{·}_{·卜{·}{·}_{·}_{·}{·}{·}_{·}_{·}{·}_{·}_{·H ·}_{·}
表4 样品A测定结果
亟目 吸光度 含量( ) 回收率(%)
由表4、表5可知应用本方法对于样品A、B测定的标准偏
差分别为1.o7%和0.94%,加标平均回收率可达99.5%,可以
满足日常检测的需求。
3 结论
本方法常温下(25cc)即可快速显色(15min)并可稳定
25min,有利于日常快速分析。
本方法的实验过程中无须通过加弱酸,弱碱调节,DH可达
5.7—5.8,为适宜的显色条件。
通过实验验证,本方法可排除实验过程中样品溶液变浑
浊,无法比色的问题,可大大提高实际工作的效率。
参考文献
[1]杨惠芬,李明元,沈文,等.食品卫生理化检验标准手册
.中国标
准出版社,1997.
[2]中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所.车间空气监测检
验方法[M].北京:人民卫生出版社,1990.
[3]中华人民共和国卫生部卫生法制与监督司.生活饮用水卫生规范,
2001.6.
(收稿日期:2003-08—2o)
维普资讯 http://www.cqvip.com
60 主国里生笪堕盘查 Q 生 旦箜 鲞箜 塑 -m望!』 of LabomI。ry1 hn0J唧2004. Flebru rv.14.No.1
一
. 量
昱
V
星
苔
匝
昌
、● ,
昌
=
e
昌
《
40
30
岂
匿20
苔
盛
肇l0
0
图1 碱性橙的吸收光谱图
甲醇含景【% ,v/v)
图2 不同流动相配比对保留时间的影响
流动相pH
图3 流动相pH对保留时间的影响
图4 标准曲线
2.3 最低栓出限将表样逐级稀释至峰高为基线噪音的
三倍,该浓度为最低检出浓度。结果为0.1 ml,以取样20.
00g最后定容到l rnl计,最低检出限为5 ks。
2.4 精密度试验按测定方法测定同一染色黄鱼样品6次。
记录测定浓度,RSD为3.85%
表1 精密度试验
2.5 加标回收试验取一已知含量的样品,分成三份加入同
等含量的标准进行处理进样分析。所得结果如下:
表2 加标回收试验
2.6 干扰性试验用同样的色谱条件对柠檬黄、日落黄标样
进行分离对结果无影响(图5)。
暑
图5 干扰试验
2.7 样品分离图谱(图6)
T im e:9.87884 M inutes.Am plltud~:0.000378
薯
O.O6
O。O4
O.O2
O.OO
暮
图6 染色黄鱼分离图谱
综上所述本方法精密度高,回收率好,在0.4一l0o.0vg/~
的浓度范围内线性关系良好,具有较高的灵敏度。对市场上
染色黄鱼的卫生监督具有较好的判定依据。
参考文献
l1 J NTP CHEMICAL REPOSITORY C.I.BASIC ORANGE 2.
[2 J International Agency for Research on Cancer,World Health Organization. I
ARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk of Chemicals to
Man.International Agency for Research on Calleer. Geneva,1971—1982.
8:9l一96
(收稿日期:2003-09—20)
0 8 6 4 2 0
维普资讯 http://www.cqvip.com