主题：【分享】【金秋计划】生物化学这几个实验必须要搞懂

实验1：天然产物中多糖的提取、分离、纯化与鉴定。
①提取方法：水提醇沉法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、酶解提取法和复合提取法。
②分离纯化方法：
脱色处理：树脂吸附法、活性炭吸附脱色法和双氧水脱色法。
脱蛋白处理：Sevage法、三氯醋酸法和蛋白酶解法。
柱层析技术：纤维素柱层析和凝胶柱层析。
③鉴定方法：
含量测定：苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。
分子量测定：高效液相色谱法、红外光谱法、凝胶渗透色谱法。
结构分析测定：高效液相色谱法、红外光谱法、核磁共振波谱法。
实验2：重组蛋白的表达、分离、纯化和鉴定。
该实验作为一个综合型实验，设计思路如下：
①引物设计与合成；
②重组表达质粒的构建；目的基因的扩增及双酶切、表达载体的双酶切、连接与转化、PCR鉴定和测序；
③重组蛋白的诱导表达、条件优化：使用IPTG进行诱导表达，需要优化的条件，包括IPTG浓度、诱导温度和诱导时间。诱导表达完毕后，进行破君处理，SDS-PAGE确定表达条件；
④扩大培养与蛋白分离纯化：进行扩大培养，破碎君体，使用Ni-NTA 纯化柱进行纯化，并使用咪唑进行洗脱；
⑤蛋白鉴定：使用BCA法进行蛋白含量测定，使用Western blot法分析重组蛋白。
实验3：RNA的提取、分离、纯化与鉴定。
①RNA的提取、分离、纯化：主要运用Trizol提取法。
Trizol试剂主要成分：异硫氰酸胍和苯酚。（1）异硫氰酸胍作用：是一类强力的蛋白质变性剂，可抑制RNase的活性避免RNA被降解，还能裂解细胞，使蛋白质变性，释放出核酸；（2）苯酚作用：酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成分层，使RNA与蛋白质和DNA分开。
②RNA的鉴定：
（1）浓度和纯度检测：使用核酸浓度检测仪器测定RNA浓度和纯度。
原理：核酸吸收波长为260 nm，蛋白质为280nm。在波长为260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50 ug/ml，单链RNA浓度为30ug/ml，计算核酸浓度。还可以根据260nm和280nm的OD比值分析核酸纯度：
OD260 /OD280=1.9～2.1，说明纯度良好；
OD260 /OD280＜1.9，说明可能有蛋白质；
OD260 /OD280＞2.1，说明RNA可能降解。
（2）质量检测：使用琼脂糖凝胶电泳，完整的RNA具有28S、18S和5S的rRNA三条带。