主题：【分享】【金秋计划】液相色谱中使用的离子对试剂类型

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发表于：2024/09/11 22:32:07 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相色谱中，我们在分析离子化合物样品时，为使目标峰有较好的保留，开发方法时会考虑加入离子对试剂（IPRs）以增加保留并改善峰形，这种也称离子对色谱法（IPC）。离子对试剂种类较多，今天小编就和大家分享下离子对试剂的类型。

根据离子对试剂的历史地位和物理化学性质等，其类型有以下几种：

01、传统离子对试剂

这类是最早被使用，到现在也是最常用的，包括以下两类：

? 阳离子型离子对试剂：常见的是带有不同链长烷基的有机胺或者铵盐，比如三乙胺，四丁基溴化铵等，加入流动相中可以增强阴离子型分析物的保留。

? 阴离子型离子对试剂：常见的是烷基磺酸盐，比如十二烷基磺酸钠，庚烷磺酸钠等，加入流动相中可以增强阳离子型分析物的保留。

02、挥发性离子对试剂

现在越来越多的实验室配置有液质联用设备，传统的离子对试剂没有挥发性，不能与质谱兼容。另外，为增加分析物的保留加入的离子对试剂，可能也会对分析物的离子化产生影响，需要使用与MS兼容的离子对试剂。

甲酸、乙酸等小分子有机酸是液质分析中常用的挥发性离子对试剂，会影响对pH条件敏感的化合物的保留行为，改变它们的带电性并提供质子化的作用。同时，这些有机酸也能够抑制色谱柱填料表面残余硅羟基的活性，对分析物的峰形有利。

当分析物对酸不稳定或者在低pH条件下没有较好分离时，可能需要更中性的条件，这种情况就需要用到挥发性盐比如甲酸铵，乙酸铵等，这些盐的pH能兼容正离子和负离子模式的检测，要注意的是使用这些盐，要关注在有机溶剂（特别是乙腈）中的溶解性。

在多肽、氨基酸等项目分析中，全氟羧酸类（如三氟乙酸（TFA）、七氟丁酸（HFBA）、五氟丙酸（PFPA））的应用增加。这类试剂也可以抑制硅醇活性、改善峰形。其中TFA由于水溶性好和低的截止波长使用广泛；HFBA有区别于TFA、PFPA的选择性，也被用于与MS联用，但是它一定程度上会污染质谱。

03、离液剂

离液剂是一种可以扰乱水分子间的氢键、增加其混乱度的盐，在离子对色谱中常见的是高氯酸盐、六氟磷酸盐、四氟溴酸盐等。加入合适的离液剂可以增强离子型分析物的疏水性，从而提高其保留。

注意事项

1）某些情况下需要严格控制流动相的pH以及检测的柱温，另外，对于要加入挥发性离子对试剂的流动相，配制时建议在溶剂液面以下放液，避免出现重现性问题。

2）使用离子对试剂的流动相条件，有时会观察到同时出现正峰和负峰的现象，这些峰会干扰建立方法或者日常检测，这类问题，主要是使用不纯的离子对试剂、缓冲盐或者其他其他流动相添加剂等。另外，不纯的离子对试剂，也影响分析物的保留时间。

3）使用含离子对试剂的流动相，特别是疏水性较强的离子对试剂，柱平衡缓慢，如果平衡时间不够，会出现保留时间漂，结果不稳定的情况，一般建议含离子对试剂的流动相采用等度洗脱条件，因为走梯度，易出现基线波动和保留重现性问题，为保证色谱柱达到较好的平衡状态，使用前最好能小流速过夜平衡。

4）较弱的离子对试剂，比如TFA、PFPA以及离液剂，这些试剂不会减慢柱平衡过程，通常用流动相平衡10-20倍柱体积就足以达到平衡。

5）当样品中同时含有酸性和碱性化合物时，这两种IPC试剂都可能有效，但我们不能把这两种试剂都添加到流动相中，这些试剂之间有形成离子对的趋势，会抵消它们对分离的净效应，而且同时使用两种试剂还会使方法建立变得复杂。

6）当需要有选择性地增加碱性溶质的保留时，首选的IPC试剂应是烷基磺酸盐，而四烷基铵盐则在需要增加酸性溶质的保留时应用。

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