主题：【分享】【金秋计划】高效液相色谱含量测定的注意事项分析

HPLC法用于含量测定时需要注意哪些问题？外标法含量计算方式有哪些注意事项是必知的？下面会进行详细介绍。
（1）HPLC法用于含量测定时的注意事项。
①色谱柱：色谱柱的差异也会影响药物的保留行为，即使是柱长、内径、粒径相同的色谱柱，由于填料性质的不同，也会对药物的保留时间、峰型有时会有较大影响。
②流动相缓冲盐的pH值：流动相缓冲盐的pH值对药物的保留行为有影响，甚至会明显改变某些碱性药物的保留行为。比如，当流动相中缓冲溶液的pH为3.0时，出峰顺序为利多卡因、苯甲酰胺、酮洛芬；当流动相中缓冲溶液的pH为10.0时，三种药物的出峰顺序为酮洛芬、苯甲酰胺、利多卡因。即使是梯度洗脱，流动相中缓冲溶液的pH值仍然对药物的保留行为产生影响。
③流动相组成：比如，复合维生素制剂的含量测定，其中含有4种维生素，包括烟酰胺、维生素B6、维生素B2和维生素B1。当流动相中己烷磺酸钠和庚烷磺酸钠的相对比例由1:1变为4:6时，对各组分的保留时间、峰形进会产生变化，甚至还会导致后面的峰分离不开的情况。
（2）外标法含量计算方式的注意事项。
①样品的称样量。
（1）称量方式：称量方法采用的是加量法还是减量法，正常情况下要采用加量法，一次称取到位，这样才能得到准确的称样量。（2）称量操作：称量时保证转移样品时不出现撒漏；（3）样品本身：如果样品具有挥发性，直接称样时，必然会挥发一部分造成误差；另外，如果样品不稳定，或在溶液中不稳定，也会影响样品量。
②对照品的含量。
（1）对照品的质量：对照品的含量值是否准确。（2）对照品的保存：如果对照品没有按照要求保存，可能会发生降解，进而影响其含量。如果对照品是保存在冰箱中，称量时，先放在干燥箱中进行回温烘干再称量。
③样品的峰面积。
（1）分析方法：如果所用的分析方法不可靠，样品峰面积或保留时间会发生变化，那么检测结果的重现性也不好；（2）污染残留：如果仪器系统被污染产生残留，而样品本身峰面积就不大的情况下，这个因素会产生较大误差；（3）样品峰形：如果样品峰形不够好，或者在分离度不够好的情况下，积分就很重要。
④样品的稀释体积。
包括仪器规格、定量操作、稀释剂的选择都会影响样品的稀释体积。