实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8081648今日发帖：231 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
食品常规理化分析
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【分享】【金秋计划】包涵体是什么？怎么办

浏览0 回复0 电梯直达
Ins_c893613c
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2024/09/06 16:36:34 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
包涵体是什么？

简单说，就是外源基因在表达过程中，形成的由膜包裹的高密度、不溶性蛋白质颗粒，尤其在大肠杆菌中，外源蛋白表达过快时很容易出现包涵体。

包涵体是由折叠错误的蛋白质聚集组成，既不是分泌型蛋白，也不是可溶性蛋白，而是在菌体经超声破碎、离心后的沉淀中。主要影响因素有哪些？

主要因素还在组成蛋白质的氨基酸，比如说疏水性氨基酸太多，或蛋白质中二硫键较多，蛋白太大等情况很容易错误折叠形成包涵体。

比如外源蛋白表达的培养条件，表达载体，表达宿主都会影响包涵体的形成。

如果出现包涵体怎么办？

到目前为止，没有很好的办法，但我们可以尽量采取措施提高可溶性蛋白的表达。比如说，

1.控制培养温度

温度高，蛋白折叠速度快，很容易形成包涵体，那么，诱导的时候采用低温诱导，比如16℃或25℃以下。

为什么低温可以减少包涵体的形成？温度低，菌体生长缦，合成蛋白的速度也慢，蛋白可以慢慢折叠形成正确的蛋白质。

2.调整诱导剂的浓度

诱导剂用来启动外源蛋白表达，适合的诱导剂浓度可以减少包涵体的形成。比如说常用的诱导剂IPTG，一般IPTG的终浓度在0.1mM-1 mM。

为什么要控制IPTG的浓度？浓度过高致使外源蛋白过度表达，折叠错误的蛋白也容易增多，积累过多就容易导致细胞生长减慢甚至停止。浓度过低又无法启动转录，起不到应有的作用。

3.选择合适的表达载体

不同的目的基因，需要选择不同的表达载体，不能随机配对。尤其是载体上启动子的类型，对外源蛋白的表达影响很大。

比如说常用的pET系列载体T7启动子，因高表达量而广泛使用，但也容易出现蛋白错误折叠，形成包涵体。

4.选择合适的宿主细胞
根据实验目的进行选择宿主细胞，比如说DH5α转化效率特别高，B21(DE3)就适合表达蛋白等等。当然，载体和宿主细胞也要匹配。

5.直接采用变性、复性方法对包涵体进行加工先通过变性剂处理包涵体，再通过复性使蛋白质进行正确折叠，形成正确的可溶性蛋白质。但过程也很复杂，也需要仔细摸索。
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
手机版： 【金秋计划】包涵体是什么？怎么办
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁