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原文由 通标小菜鸟(v3141805) 发表:感谢大佬，我是等梯度洗脱的，也就是65%-65%洗脱30分钟这样子，柱子是常规C18 ods柱，250mm×4.6mm×5μm，柱温设置的是35摄氏度。
楼主，其实65%乙腈、60%乙腈、50%乙腈条件下，三个峰的分离度是差不多的，你可以仔细观察。之所以看上去65%乙腈峰看上去好看，并不是因为三个峰分离了，而是峰高更高，更尖锐造成的，峰谷那块依然没有分离开。从65%乙腈到50%乙腈，峰高降低，峰宽变宽，峰更塌了，所以看上去像分离度变差了。建议楼主还是延用65%乙腈，另外还请楼主把其它色谱参数发上来，比如洗脱程序，柱子尺寸型号，还有柱温等等。
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