3 结果与讨论 3.1 提取净化条件的确定
灭蝇胺和三聚氰胺均微溶于水,常温下灭蝇胺溶解度为11 g/L,三聚氰胺溶解度为3.3 g/L,是弱碱性化合物。为简化前处理,减少浓缩步骤,采用极性较强的甲醇和水混合溶液提取样品,分取部分酸化后的提取液直接经离子交换柱净化。
灭蝇胺和三聚氰胺的pKa分别为5.2和8.0。为保证待测物在含苯磺酸基团的阳离子交换柱上得到较好保留,提取液pH值应在上柱前调节至低于待测物pKa值2个单位。在样品提取液中加入8 mL 0.5 mol/L HCl并定容至100 mL,测定多种基质提取液的pH值,其变化范围为1.5~2.5,保证基质中的待测物在阳离子交换柱上获得较好保留。
3.2 色谱条件的选择
比较普通反相色谱和亲水作用色谱对三聚氰胺的色谱保留差异。采用Luna C18色谱柱(150 mm × 2.0 mm,3 μm)或极性端基封尾的Synergi HydroRP C18色谱柱(150 mm×2.0 mm,4 μm),后者对极性化合物(如四环素类抗生素)的保留较好。但检测三聚氰胺时,即使采用高比例水相,即V(乙腈)∶V(水)=1∶9,流速为0.2 mL/min,三聚氰胺在反相色谱柱上仍基本无保留,出峰时间小于1.5 min,实际样品检测时易受杂质干扰。而采用Hilic柱(100 mm×2.0 mm,3 μm),以V(乙腈)∶V(0.1%甲酸水溶液)=9∶1为流动相,流速为0.2 mL/min,三聚氰胺的保留时间为3.1 min,稳定性和重复性都较好。实际样品检测时,与干扰杂质的分离度能满足要求。
3.3 线性范围与基质效应分析
用流动相稀释一系列标样,灭蝇胺或三聚氰胺的浓度分别为0.01、0.04、0.08、0.15和0.25 mg/L。以浓度为横坐标,峰面积响应值为纵坐标,进行线形回归,灭蝇胺回归方程为Y=36039x+137526,r=0.999;三聚氰胺回归方程为Y=17637x+36310,r=0.999。
本实验分析了黄瓜、蘑菇(食用菌)和韭菜中的基质效应。选择空白样品,按照2.3所述步骤操作,在定容前添加标准物质,使灭蝇胺和三聚氰胺的浓度均为0.01、0.04、0.08、0.15和0.25 mg/L。测定基质标样的响应值,将浓度与响应值进行线性回归。所测3种基质对灭蝇胺或三聚氰胺的电离抑制程度相似,基质标准曲线斜率与溶剂标准曲线斜率相比结果显示:蘑菇、黄瓜和韭菜基质中灭蝇胺的响应为溶剂标样的41%、49%和52%;3种蔬菜基质中三聚氰胺的响应均约为溶剂标样的78%。本实验中,将空白基质稀释100倍后添加标准物质进行分析,
灭蝇胺的响应约为同浓度溶剂标样的60%,三聚氰胺响应约为同浓度溶剂标样的85%。实验表明,通过柱净化,样品中仍存在大量干扰物,通过稀释降低杂质干扰效果不明显,需要利用其它复杂手段如凝胶色谱、二维
液相色谱等净化方式才能降低基质干扰,或是采用同位素校正消除基质效应。由于同位素标样价格昂贵,本实验利用基质标准曲线计算目标物含量。
3.4 方法回收率、精密度、检出限和定量限
分别在黄瓜、蘑菇和韭菜3种空白样品中添加灭蝇胺和三聚氰胺,添加浓度分别为0.04和0.2 mg/kg,每个浓度平行5份。 在选定的色谱质谱条件下,分析阳性蔬菜样品中灭蝇胺和三聚氰胺。分别以噪音信号的3倍和10倍计算方法的检出限和定量限。灭蝇胺和三聚氰胺的方法检出限(LOD)分别为0.003 和0.001 mg/kg;定量限(LOQ)分别为0.01和0.005 mg/kg。
3.5 样品分析结果
随机抽取市场上的40个蔬菜样本(5个韭菜,7个黄瓜,8个食用菌,7个芹菜、4个辣椒、3个番茄、2个芥兰,生菜、白菜、青菜和茄子各1个)进行检测,结果表明,在我国的蔬菜种植中确有使用灭蝇胺,但残留量均未超过相关的限量标准值。芹菜和黄瓜同时检测出灭蝇胺和三聚氰胺,说明三聚氰胺确有可能由灭蝇胺代谢产生。其它样品三聚氰胺残留范围为0.009~0.075 mg/kg,含量低,且同时未检出灭蝇胺,有可能灭蝇胺已完全降解,但也有可能由三聚氰胺迁移引起,三聚氰胺是一种用途广泛的有机化工原料,用作聚乙烯制品的阻燃剂等,在环境中普遍存在。鉴于此,蔬菜中低含量的三聚氰胺残留来源有待进一步研究