主题：【第十七届原创】【金秋计划】+国农验证-农残能力验证经验分享

【金秋计划】+国农验证-农残能力验证经验分享

鹤壁市产品质量检验检测中心 张艳丽

      6月下旬我们参加了农业农村部组织的2024年农产品质量安全与营养品质检验检测业务技术社会化能力验证，从接到这个能力验证的通知以后，做了充分的准备，整个实验过程中都非常顺利，分享给大家能力验证的经验。

        一、准备工作

      提前一周做准备工作，主要从仪器、玻璃器皿、标液、基质样品、辅助设备、人员分工等方面。

      1.仪器

      这次申报的是A类30种定量检测，把30种农药分成三组，分别由气相色谱仪、气质联用仪、液质联用仪来检测。三台仪器分别由三个不同的操作人员进行仪器维护，比如用高惰性衬管、色谱柱、流动相等，让仪器处于最佳的工作状态。在这三种仪器上配置相应的标液，制作标液模板。

      2.玻璃器皿

      这30种农药涉及到三个方法， NY/T 761-2008、GB 23200.113-2018、GB 23200.121-2021等，这三个方法要用的玻璃器皿、一次性针管、有机滤膜等都做了准备。玻璃器皿都用热水加洗洁精超声，用纯水洗净再用乙醇冲洗。
      玻璃器皿上做标记，分别标明空白1号、空白2号、盲样1、盲样2、加标1、加标2等。做前处理时，空白只用标记空白的瓶子，防止交叉污染。

图1：做标记的玻璃器皿

        3.基质样品

        能力验证样品的基质为结球甘蓝，从4家不同的超市购买了包菜，用温水加氯化钠浸泡过夜，破碎冻入冰箱，用GB23200.121方法做前处理，分别上机，测试基质是否干净,最后决定用Y超市的包菜做基质。

图2：蔬菜基质

        4.标液

        30种农药标液均为农业农村部环境监测所单标，浓度为100ug/mL，需要配制成10.0ug/mL的单标。配制时用万分之一天平，将棕色瓶放天平上，清零，整支标液打开倒入瓶中，记录数据，比如0.7213g，然后加入所用溶剂丙酮、正已烷、甲醇等，总量为7.213g时，浓度为10.00ug/mL。

图3：用万分之一天平配标液

      5.辅助设备

      前处理过程要用到烘干器、氮吹仪、清洗玻璃器皿的盆子等，都要做标记。

      烘干器用来烘干瓶子，两个烘干器一个标记空白，只烘干空白样品与试剂空白；另外一个标记盲样，烘干盲样与加标样品。

      氮吹仪上氮吹针头做标记，按空白、盲样、加标样等标记，前处理时，按标记氮吹相应样品，氮吹针头用完后放大烧杯中超声，再用乙醇清洗。

    清洗玻璃器皿时，在清洗盆子上也做标记，空白样品与盲样的玻璃器皿分开清洗。

        图4：辅助设备做标记

        6.人员分工

        本次能力验证挑选了几位经验丰富的检测人员，为防止人多手杂，先进行了详细分工，从仪器操作、前处理、数据上报等三个方面进行了分工，每个步骤都是两人或三人完成，两人中一人为主操，一人为监督人员。比如配制标液，从移液枪刻度、容量瓶、标液名称等全程监督，防止配制标液时出错。

图5：人员分工

      7.预试验

      能力验证样品共发入三份样品样品基质为结球甘蓝每份样品重量约20克，样品状态为冻干粉，其中一份为空白基质样品，编号为ck，另外两份为考核样品，样品号为87、191号。

图6：考核样品

      能力验证作业指导书上要求，样品检测前需对样品进行催化，再按相应方法进行前处理操作，水化过程按1:9的比例，向样品中加水后混匀静止30分钟，样品的最小称样量为1g。

      每个样品称样1.00g，加9.0g纯水，用GB 23200.121方法进行前处理，上机检测。有6种农药检出，克百威、毒死蜱、甲基异柳磷、氯氟氰菊酯、六六六、甲氰菊酯等。

用气质联用仪检测，排除了六六六的检出，用液质联用仪排除甲氰菊酯的检出。最后确定有4种农药检出：克百威、毒死蜱、甲基异柳磷、氯氟氰菊酯。

      二、质控样

      实验室有东莞市恒准标物计量研究院有限公司      生产的韭菜、芹菜中毒死蜱的基质标物，此次随能力验证样品一起做前处理。前处理方法为NY/T 761-2008、GB 23200.121-2021。

图7：能力验证样品与质控样品

图8：NY761方法有机磷前处理

图9：NY761方法有机氯前处理

图10：GB 23200.121方法前处理

表1：能力验证样品及质控样品结果

        四、加标样品

      根据上述结果，配制加标样品，用Y超市的包菜做加标样品，发现用气相色谱仪ECD检测时，背景干扰大，杂峰较多。而能力验证空白样品CK上机检测时，背景干净，选择用CK做加标样品。

      1.收集基质

      用CK样品做NY761方法与GB23200.121方法的前处理，收集基质为CK有机磷基质、CK有机氯基质、CK121基质。

图11：收集CK基质

      2.配制标液

      先将上述4种标液配制成2.0ug/mL单标，毒死蜱用CK有机磷基质稀释成0.1ug/mL，氯氟氰菊酯用CK有机氯基质配制0.5ug/mL的标液，克百威、甲基异柳磷用CK121基质配制0.05ug/mL标液，上机做模板。

      3.加标浓度

      加标浓度与能力验证样品浓度相近。标液浓度为2.0ug/mL，吸克百威标液250uL到1.0g菜中，加标量为0.5ug/mg；吸甲基异柳磷标液200uL到1.0g菜中，加标量为0.4ug/mg；吸毒死蜱标液250uL到1.0g菜中，加标量为0.5ug/mg；吸氟氯氰菊酯标液（10ug/mL）100uL到1.0g菜中，加标量为1.0ug/mg。

      4.加标回收率

      加标样品与能力验证样品同时做前处理，计算加标回收率，所有样品均用4台仪器上机检测，液质联用仪与气相色谱仪的ECD检测器比较灵敏，发现平行样品的重现性大于20%，猜测可能是加标浓度太大所致，将样品稀释5倍，吸250uL样品加1mL溶剂后再次进样，平行样品重现性《10%。

      加标回收率均在80%-120%之间，上报数据不做回收率折算。

表2：加标回收样品及能力验证样品结果表

        五、报结果
      数据上报时有个平台，输入数据，并上传原始记录、图谱的电子版即可。

      六、证书

      8月底从数据上报平台得知能力验证结果，随之而来还有一个通过证书。

图12：能力验证结果函与证书

      七、总结

      这是第一次参加农业农村部组织的能力验证，前期准备非常充分，能力验证过程顺利，能按时完成数据上报。有几点做的很好，大家可以参考。

      1.质控样

      实验室里有基质标物，要做质控样，虽然加标回收也可以反映数据的准确性，但如果标液浓度是错的或标液污染了，加标回收也会很准确。

      2.标液配制

      购买的标液一般为100ug/mL，要稀释成10ug/mL，通常做法是吸1mL，溶解至10mL容量瓶中，但实际上所买的标液不够1mL，想配成10ug/mL时是不行的。用万分之一天平配制，直接配制到棕色瓶中，不通过容量瓶，可以准确配制成10ug/mL浓度。

      3.基质选择

      做加标回收会用干净的基质，可以自行购买，也可以用所给的空白样品当基质，我们发现自行购买的包菜基质，不如所给的CK空白干净， 尽量选用能力验证CK样品当基质。

        气相色谱仪、气质联用仪是基质增强，液质联用仪是基质抑制，配标液时要用基质配标液，这样可以很大程度减少基质效应。用CK样品分别做不同的前处理，收集不同的基质溶液，配标液时可以用它定容。

        4.仪器灵敏度

      气相色谱仪的ECD检测器与液质联用仪灵敏度较高，这时需要稀释样品5倍或10倍后上机检测。超过仪器的上限，数据会偏差很多。

      5.多仪器检测

      即使某一个前处理方法，也可以同进上多台仪器，做参考。气质联用仪、液质联用仪定性准确，气相色谱仪定量准确，要利用多台仪器的优点，互相验证，得出准确数据。

      6.防止污染

      做能力验证时，因为标液污染或标液配制错误，回收率正常，但盲样数据失真。从玻璃器皿、氮吹仪、烘干器、洗盆等方面都做了标记，减少污染的可能性。

      7.人员培训

      能力验证前，要进行详细的人员分工，然后针对前处理、仪器、配标液等方面进行人员培训，让每人都明白在能力验证过程所承担的任务，对前处理关键步骤进行培训，掌握要点，保证数据的准确性。