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主题：【原创】极限体验之利用月旭柱和薄层色谱来选择流动相

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chqiu111111
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发表于：2010/05/23 23:07:56 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被月旭科技--小S设置为精华； 奖励积分记录： 月旭科技--小S(20分)
月旭柱型号：XB-C18，5μm，4.6*250mm



我在用月旭柱在测定一个混合物，之前我是不知道到底混合物中是有什么物质，所以用4种pH的来做对物质液相条件进行摸索。这里的进样物质全部是一个样品，此进样物质的混合物且全部是酸性物质，可能水溶液在ph3左右会沉淀出来。由于现在还是处于摸索阶段，所以物质我也不确定，没有对照品，所以请各位见谅，我只拿出来把我的思路和不懂的地方一起学习，探讨！
流动相：25mmol  ph8的磷酸盐缓冲液：乙腈=95：5



图1、此时出现的是3个大峰。说明在这个情况下，有3个主要的物质。

流动相：25mmol  ph5的乙酸钠缓冲液：甲醇=80：20


图2、此时除了前面3个峰之外，在9分钟左右又出现了一个大峰。



流动相：25mmol  ph5的乙酸钠缓冲液：甲醇=90：10


图3、此时除了前面3个峰之外，在9分钟左右又出现了一个大峰。此时与图2相比，只是甲醇的比例不同而已，但是9分钟出峰的峰面积却完全不同，我不懂为什么会出现这种状况。请各位高手指教。

流动相：25mmol  ph3.5的磷酸盐缓冲液：乙腈 =95：5 


图4、此时中间2-6分钟只有一个峰，却出现了新的峰，0.8分钟和11分钟。不懂是什么原因引起的，我猜想，是不是因为这个柱子的填料把我的物质吸附了啊？



流动相：10mmol ph8的乙酸铵缓冲液：乙腈 =95：5 



图5、此时流动相的PH和图1一致，峰也差不多一致。



后面我不确定用哪个是比较准确的流动相，所以想通过其他的方法来确定。所以后面我用3种不同的溶剂来展开，点板。出现了3个主斑点，且比移值相差不大，这里板没有拍照，所以就没有照片了哈。所以我确定选择pH8的时候是正确的。我也不懂到底对否，希望各位高手指点一下。



我现在不懂的地方主要是：为什么流动相pH不同会影响这么大，我的意思是按照道理，应该是不管流动相ph是多少，主峰的个数是一样的，但是现在却不同，是由于什么原因呢？是因为物质与硅胶结合了吗？还是其他的原因？根据图1和图2来看，为什么图2在9分多钟还会出现一个大峰呢？
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2010/5/25 0:49:36 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
呵呵，所以说高端仪器还是得配上普通仪器方法才能更好地进行分析实验。
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huaibeijiayuan
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2010/5/25 7:08:24 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
会不会是样品残留呢，PH调整后，强保留物质被洗脱出来了
该帖子作者被版主 samanthalas加 3积分， 2经验，加分理由：欢迎参与讨论
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tianhaikuo
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2010/5/25 13:22:35 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相ph不同，其极性就不同，对相同物质的洗脱能力或保留能力也不同。
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laibuxyf
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2010/5/25 15:03:40 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错不错，初来乍到的，多多提拔丫
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chqiu111111
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2010/5/25 16:01:57 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 huaibeijiayuan(huaibeijiayuan) 发表:
会不会是样品残留呢，PH调整后，强保留物质被洗脱出来了


我不知道，找了很久的原因，都不懂为什么，会不会是因为硅胶与我的物质结合在一起了啊？后面我一直用醇洗脱，都没有东西出来。
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chqiu111111
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2010/5/25 16:03:10 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tianhaikuo(tianhaikuo) 发表:
流动相ph不同，其极性就不同，对相同物质的洗脱能力或保留能力也不同。


这个肯定是有影响的，不过峰的个数不一样，说明物质也不一样，但是我是同一个样品的啊？不懂是何原因
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东风恶
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2010/5/26 20:56:17 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
建议结合您的合成工艺，参考相关文献，对起始原辅料进行相应的分析，可以用DAD检测器扫描光谱图，还有您的中间体。
根据您的合成工艺初步判断可能产生的物质来慢慢摸索。
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chqiu111111
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2010/5/26 23:57:16 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 东风恶(luoleqc) 发表:
建议结合您的合成工艺，参考相关文献，对起始原辅料进行相应的分析，可以用DAD检测器扫描光谱图，还有您的中间体。
根据您的合成工艺初步判断可能产生的物质来慢慢摸索。


恩，这个我试过了，不同条件的ph峰型不一致所以就没有显示出来啊。
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毛毛儿
yangxy12345
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2010/5/27 7:51:38 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果不知道待测物的性质，盲目改变色谱条件，也不一定能成功啊！
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zxhcnf
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2010/5/27 13:18:40 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先感谢楼主的辛苦，让我们一起分享您的经验，谢谢！
您这个应该属于方法开发，方法开发的过程通常是按这样一个顺序来进行的：
1. 首选C18柱；
2. 确定检测波长，如果波长不能很好的确定，则选用210nm，用乙腈和水的体系来进行初步的实验；
3. 先用纯乙腈（如果波长确定了，并且甲醇不会带来本底影响时，首选甲醇）来做流动相，看它的总的峰高和峰面积是怎么样的；因为这么强的洗脱能力，通常会把所有的组分都洗脱出来，那你就清楚总体是个什么样子了。
4. 然后再将流动相中乙腈的比例10％的量递减，看谱图里面峰会出现什么样的变化,如从纯乙腈做流动相变为乙腈：水＝90：10时，会多出来几个峰？峰大不大？峰朝哪个地方移动？这样10％的变化，一步一步的，流动相从纯乙腈变道纯水，你就可以大致的知道，你的样品有几种物质，这些峰从哪个峰里面分出来的，这些峰的来龙去脉都弄得清清楚楚。（当然，有梯度泵就简单多了，用不着10％的量来调）
5. 选一个认为分得比较好的条件，再来调节pH，分开后，再来想办法调整峰形。
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2010/5/27 13:21:38 Last edit by zxhcnf
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