主题：【第六届原创】同位素内标使用中的一次教训

这几天，实验室做了动物源性食品中氯霉素残留量的检测，使用是现在流行的液相色谱-串联质谱法，同位素内标法定量。

在配了系列标准溶液进样后，发现线性不好，R2不到0.4。严重线性不符。如下图，低端的几个点偏离严重。可以看标准曲线上面的残差的值，标曲低端的点的残差达到了1500。



将低端区域放大后，看的更清楚。



标准曲线的配制过程中，操作没问题，初步断定为氯霉素的污染。可能是仪器系统内部的污染，或者是溶剂污染。在经过0体积进样、空白溶剂、样品空白等检查后，发现溶剂及仪器系统没发生污染。而方法空白中有氯霉素峰出现。

如下图所示，从上到下的通道分别是方法空白、溶剂空白、纯乙腈、水、0体积进样。



注：方法空白：以水代替样品，按方法处理。溶剂空白：定溶液。

由此可见，污染发生在样品处理的过程中，而方法处理过程中，加入了同位素内标。

在拿1ng/ml的CAP-D5直接进样后，发现有明显的氯霉素峰。

下图上面的两个通道即为CAP-D5直接进样的CAP-D5通道和CAP通道。下面的两个通道是0.05ng/ml的标曲点的CAP-D5通道和CAP通道。在标曲中，加入的同位素的量为1ng/ml。根据峰高的对比，同位素内标中氯霉素的含量约为0.03ng/ml。



由此，在实验中的各种现象都可以合理解释。

如，溶剂、水以及仪器系统都没有污染现象，而方法空白中有明显的氯霉素峰。

在标准曲线的各个点中，0.001、0.005 ng/ml的两个点氯霉素峰高接近，而0.05ng/ml的点的氯霉素峰高了一倍，0.1ng/ml的点的氯霉素峰为0.05ng/ml这点的2倍。从0.05ng/ml以后的点呈线性。

下图中的各个通道，从下到上1-4为0.001ng/ml点的重复进样，5、6为0.005ng/ml点，7、8为0.05ng/ml点，9、10为0.1ng/ml点。



本次实验中使用的同位素内标已经购入多年，大概06年购入的，-20度保存。有可能是在使用过程中造成了同位素内标的污染，或者是多年的放置后发生了变质。

由这次实验，得到了点启示，象氯霉素这种检测要求很严格的物质，稍微疏忽就可能造成结果的不可信。

以后，同位素内标也要经常核查一下。