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凝胶色谱（GPC）
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主题：【第三届网络原创参赛作品】液相色谱之玩法—普通液相色谱改成凝胶色谱实录

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wanttofly
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发表于：2010/07/01 20:14:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为yaofei原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

去年写液相色谱之玩法—正相色谱时就说准备凝胶色谱,由于种种原因,边做边写,到六月初才写完,看到大奖赛消息,拖到今天才发,原来的文章有不少无关技术的内容,很是犹豫要不要,有了显得太罗嗦,但是删了又觉得少了些什么,所以我还是决定把原文附上,而在正式的帖子中我会有所删节
附件：
GPC组装.doc
该帖子作者被版主 有水有渝加 10积分， 2经验，加分理由：内容详尽，图文并茂，充分展现原创性！
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2010/7/1 20:20:35 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1．前言
单位原来有2台安捷伦液相色谱：
1100：2003年购置，最简单配置，包括：双元泵、可变波长紫外检测器，双元泵的其中的一个通道因为作正相色谱被我换上了氟材料的密封圈；
1200：2007年购置，包括：四元泵带脱气机、柱温箱、二极管阵列检测器、折光检测器。
在我们单位,这2台仪器休息的时间比较多,偶然的阴差阳错，让我做一个聚合物粘度的测定工作。在测定的时候，我很多事地问课题组既然研究分子量，为什么不用GPC测，他们说我们分析室测不了，这个样品不溶于四氢呋喃，课题组联系了很多地方，拥有四氢呋喃体系GPC没有一个肯换成氯仿来做。我立刻说我们只要买根凝胶柱就可以自己做，他们也很有兴趣，很快向领导汇报了。现在的经济形势不太好，领导很慎重，要求做好调研工作。课题组联系外送测试，而我就考虑配置。其实在之前我只对GPC有些纸上谈兵的印象，根本没做过，只不过我想其它课题基本已经成形，只有这个聚合物工作才开始，如果不抓住这个机会，也许液相色谱真的无出头之日了。
不过后来事情发生了变化，课题组找了氯仿体系的GPC，测试费250/个，而我了解到凝胶柱比普通液相柱贵很多，就算日本的比较便宜，也要近1万元1根，而且一般都会用多根凝胶柱，标样一套也要几千元，仅从经济利益上来说自己做不太合算，因此觉得不会自己做了。当我和课题组长交换意见时，他却询问我原来仪器的价格，他说他会跟领导说第一：用几万元发挥了几十万元仪器的功能，是值得的；第二：这个不仅是为一个项目做，以后和聚合物有关的项目都可以用。结果领导不但批下来了，而且后期一直追问进展情况。我想液相色谱如果有知，应该感谢这样知人善任的课题组长。
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2010/7/1 20:21:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2．配置方案
从硬件讲，GPC比一般的液相色谱简单，毕竟只要一个通道，如果直接用原有的1200配置也是可以的，不过四元泵实际是一元泵加比例阀，如果用于GPC，要将比例阀旁路。需要另外买一个转接头（货号P/N 0100-1847），更重要的是我不清楚氯仿对普通柱塞密封圈是不是有影响，因此用1100双元泵的那个四氟柱塞泵的通道是比较稳妥的。至于脱气机，反正不混合，而且听说安捷伦的脱气机还比较娇气，不用也罢。这个样品没紫外吸收，只有用1200配的折光检测器，有了折光检测器就得加柱温箱。既然说还要为其它项目做准备，所以紫外检测器还要留着。虽然2台仪器一直在睡大觉，但不能因为我做了GPC就变成一台了，所以剩下的还是要组成一个完整的体系，以备不时之需。
最后配置方案：
GPC：双元泵、柱温箱、折光检测器、可变波长紫外检测器（备用）
普通液相色谱：四元泵加脱气机、二极管阵列检测器
由于领导批准的爽快，我做计划时还是选了PL的色谱柱，不是说贵的一定好，只不过一是科研单位包括文章中用的比较多，第一次做，就当买个放心吧；二是从瓦里安买比安捷伦价格便宜了很多（不知道归了安捷伦以后价格如何），比我预算要低。最终采购拿来给我确认配置的合同上是三万零八元，包括一根保护柱、二根色谱柱、10套10分子量的一次性混标，另外还采购了一些针头过滤器、过滤白头之类液相色谱必备的耗材。
采购计划交上去，我就安心地开始着手仪器的组装、软件的安装及调试了
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2010/7/1 20:22:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3．软件安装
不怕被人说成傻瓜，一直觉得安捷伦的软件很贴心。我以为所有人都知道安捷伦的软件都是液相气相共用，并且新版本可以用在旧机器上。不过自从听说有人安装软件都要服务工程师上门，知道并非所有人能都像我这样有机会折腾。
首先，安捷伦的化学工作站的版本必须和操作系统匹配，否则会出很多问题。但是如果你找不到合适的操作系统，你可以找合适的工作站版本。安装时选2070安装液相、2170是安装气相，只要输入相应的系列号即可，本来觉得这个行为可能算使用盗版，现在觉得新版本软件既然能用旧系列号，证明不是盗版，这能说是打相应的版本补丁，毕竟系列号是我买的。
用GPC都要配GPC插件，我很久以前为了好玩跟别人复制过GPC插件，在不同的A版本化学工作站装成功过，但这次拿出来却发现B版上不兼容，只好去搞了新版插件。所以插件不一定是每个版本都有对应的，但至少A版和B版插件版本是不一样的。操作软件的报告内容要理解还得去补一下高分子的基础知识，不过分析人员依照操作说明依样画葫芦就能做了，安捷伦科技大学网站有详细的操作软件说明下载，我以前就靠着这份说明硬是在没有硬件的脱机情况下学会使用它的。不过因为有人说安捷伦这个软件不好，而GPC插件仅是个纯粹的数据处理软件，所以我现在恶补高分子知识的同时也在寻找其它GPC软件，将来可以将液相测定数据导出后用其它软件处理。
（从网上下载的培训资料，不算正文内容，放在这省得大家找了）
附件：
GPC培训教材.pdf
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2010/7/2 5:40:09 Last edit by yaofei
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2010/7/1 20:30:38 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
4．仪器连接调试

本来以为模块化设计的液相色谱硬件连接是很简单的事，只要花点力气就行。我把各模块按照需要垒好，但连好发现网卡装在新的模块上电脑认不出旧的模块，换到旧的模块上面认不出新的模块，连线、网卡反复替换检查发现没问题，只好打电话给安捷伦客服求救，他们回答这是很正常的，需要固件升级，收上门服务费960元。因为以前从来没考虑过兼容问题，也没有提过此方面的费用。事情到了这个重要关头，我不想因为一点小事耽误了进程，我知道固件升级跟计算机刷BIOS一样，没什么困难的，于是托人（安捷伦重要客户）帮我讨要升级软件和相应的版本，对方答复不建议自己升级，联系了一个工程师来帮我升级。来了以后，我才知道升级软件和相应固件版本在软件光盘里都有，其实告诉我就行了，不过工程师说如果BIOS坏了就得换板子，这样如果不幸碰到死机断电的事损失就大了（我认为没必要，完全可以在电脑城找人用专门机器重刷或拆下BIOS完好的废板子重刷，不过没试过，没有发言权）。
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2010/7/2 4:59:19 Last edit by yaofei
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2010/7/2 5:01:50 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
打开软件光盘LC Firmware文件夹里有个Fwu date setup的安装程序，双击即可安装Fireware升级软件，还有2个pdf文件是讲软件使用和各模块版本信息的，需要升级的Firmare版本在LC文件夹下
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2010/7/2 5:05:55 Last edit by yaofei
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2010/7/2 5:07:07 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
安装了fire ware升级工具后出现了Fire ware Up date Tool的图标，胆大的同仁就可以根据说明自己升级固件了。图2是我的仪器升级后的版本信息，可以看到二元泵、柱温箱及折光检测器升级后的固件版本号
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2010/7/2 5:07:58 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
升级完以后，仪器的各模块就可以相互联系了。下图是仪器实物图，新旧模块颜色对比还是比较强烈的，一看就是拼起来的，从上至下分别为二元泵、柱温箱、折光检测器、紫外检测器，边上是手动进样的六通阀。

因为考虑氯仿的挥发性，所有的仪器废液都放在通风柜里，按照惯例，折光检测器是应该放在紫外检测器后面的，我暂时不用紫外检测器，为了尽量减少死体积，柱温箱和折光检测器放在一起，连接的管路也基本上切割得刚好，备用的紫外检测器在这里只是起个支架的作用。
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2010/7/2 5:08:41 Last edit by yaofei
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2010/7/2 5:10:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
5．测定

测定前开始平衡，折光检测器自从买来就没用过，也不知道基线噪声多少算平衡好，不过折光检测器有循环通道，索性平衡了一个晚上再做，反正试剂基本上不消耗。

首先做标准曲线，本来我打听了很多标样，单标、混标，各种价格相差也很大，没用过也不知道该怎么选择，想先跟着PL柱子买点进口的一次性混标试试，正常后再根据自己需要选用国产的标样，当时人家销售跟我说10个分子量10组20瓶，成交价格2千多，我对这个价格一直有点怀疑，因为有些给我的报价进口单标一瓶就要1000多，所以在合同上采购让他们注明了20份/件。拆开看发现是20个小棒子，每个棒子上沾点聚苯乙烯，不能说上当，只能说一分价钱一分货，不过用起来还是很方便的。把棒子插在放有2ml氯仿的样品瓶中溶解后取出，用进样针进10微升左右。10个分子量取了9点，分子量580的已经在色谱柱的下限了，峰很宽，做进去没什么意思。
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2010/7/2 5:14:10 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
标样谱图及标准曲线

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2010/7/2 5:17:29 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品溶解后进样，除了样品的一个峰外，最后还有3个负峰（后面讨论），有时为了省时间，没等负峰出完就进第二针，负峰就会在样品的前面，但不会影响样品的分子量测定



按照GPC插件的操作得到报告，如果参照软件的说明采用原来的屏幕观看方式看起来既不清晰也不方便，我装了一个pdf打印机程序并选为默认打印机，在GPC插件中点击打印，便出现了较为清晰pdf文件页面。
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