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主题：【分享】双向电泳常用溶液配方

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儒雅凤
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发表于：2010/07/06 22:47:25 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊

双向电泳常用溶液配方



A. 水化/上样缓冲液(rehydration/sample lysis buffer)

水化上样缓冲液（I）                    1ml





urea

8M 

0.48g


CHAPS

4%

40mg


DTT

50~65mM

7~9.8mg


or TBP

2mM

10µl


40% Bio-Lyte

0.2%(w/v)

5µl


1%溴酚蓝

0.001%

1µl


MilliQ水



650µl


                                                             

水化上样缓冲液（II）                      1ml     





urea

7M

0.42g


thiurea

2M 

0.152g


CHAPS

4%

40mg


DTT

50~65mM

7~9.8mg


or TBP

2mM

10µl


40% Bio-Lyte

0.2%(w/v)

5µl


1%溴酚蓝

0.001%

1µl


MilliQ水



650µl


                                                                                         



1.      水化上样缓冲液（I）中的尿素浓度可以调高到9或者9.8M；用7M Urea和2M Thoiurea溶解蛋白的能力较单用尿素强。

2.      目前常用的去垢剂为CHAPS，也可用Triton X-100、NP-40等代替。

3.      可以加蛋白质酶的抑制剂和/核酸酶。

4.      还原剂可用DTT或TBP，分离碱性蛋白时最好用TBP。

5.      5溴酚蓝作为指示剂，可以监测上样和聚焦过程，如操作熟练，可以不加。.
该帖子作者被版主 有水有渝加 5积分， 2经验，加分理由：感谢凤版主分享
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儒雅凤
liwei7893
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2010/7/6 22:48:08 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
B．溴酚蓝储液

Final concentration    Amount

Bromophenol blue

1%

10mg

Tris-base

50mM

6mg

MilliQ H2O

to 1ml

                                       



                                                 

C. 胶条平衡液贮存液（SDS equlibration buffer）

(50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)





Final concentration

Amount


1.5M Tris-cl,pH8.8 

Urea (Fw 60.06)

Glycerol(87% v/v)

SDS(Fw 288.38)

1%Bromophenol blue solution



50mM

6M

30%(v/v)

2%(w/v)

0.002%(w/v)

6.7ml

72.07g

69ml

4.0g

400μl 

To 200ml


分装后贮存于-20℃；溴酚蓝可以不加；

用之前在加DTT(20mg/ml)或者碘乙酰胺(25mg/ml)。

D. 10% (v/v)SDS溶液

SDS(Fw 288.38)        10.0g

MilliQ H2O            To 100 ml

用0.45微米的滤纸过滤室温保存(高纯试剂一般不用过滤)

E. 聚丙烯酰胺单体贮存液（Monomer stock solution）







Final concentration

Amount


Acrylamide

30%

150g


N,N’-methylenebisacrylamide

or PDA

0.8%

4.0g

5.0g


MilliQ H2O



To 500ml


用0.45微米的滤纸过滤(可不过滤), 4℃避光保存
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儒雅凤
liwei7893
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2010/7/6 22:48:33 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
F. 4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer, 1.5M Tris-Cl pH8.8)





Final concentration

Amount


Tris-base(Fw 121.1)

MilliQ H2O

HCl(Fw 36.46)

1.5M

181.5g

750ml

Adjust to pH8.8


MilliQ H2O



To 1000ml


用0.45微米的滤纸过滤，4℃保存



G. 10%过硫酸铵





Final concentration

Amount


Ammonium persulphate(APS)

MilliQ H2O

10%

1g

To 10ml


当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。可少量(10ml)配制，分装后4℃保存。



H. 电泳缓冲液（TGS electophoresis buffer）

(25mM Tris,192 mM glycine, 0.1%SDS)





Final concentration

Amount


Tris base

Glycine

SDS

MilliQ H2O

25 mM

192mM

0.1%(w/v)

15.1g    7.55g

72.1g    36.05g

5.0g      2.5g

To 5000ml  To 2500ml


该溶液的pH值不需调整，可直接在大试剂瓶中配制溶液，室温保存。



J. 琼脂糖封胶液（Agrose sealing solution）





Final concentration

Amount


TGS electophoresis buffer

Agrose (NA or M)

1% Bromophenol blue

    ---

0.5%

0.002%(w/v)

50ml

0.25g

100μl


可在锥形瓶配制，微波炉加热熔化。小份分装，室温保存。
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2010/7/13 14:08:19 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢 留着用了
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