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液相色谱（LC）
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主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

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xue2009
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2010/7/26 19:36:20 56楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yongzhbenq(yongzhbenq) 发表:
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
4）流动相中加入适量的四氢呋喃
    往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者都知道和使用，但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5％以内即可，需要的时候可以加入更大的量。

请问LZ，这个机理是什么呢？我有和别人交流过：向流动相中加异丙醇，四氢呋喃可以提高流动相的溶解度，改善峰型等等，原因我现在只是知道这些物质的洗脱能了更强。

《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：乙腈为质子给予体、甲醇为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法

它的意思是说甲醇是质子酸，乙腈是非质子酸，做流动相时选择性有差异
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xieqinqin
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2010/7/26 19:43:45 57楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：用的是四元梯度泵  A50%甲醇 B50% 水  经常出现停 或进气泡  这是什么原因？
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xue2009
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2010/7/26 19:49:10 58楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xieqinqin(xieqinqin) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：用的是四元梯度泵  A50%甲醇 B50% 水  经常出现停 或进气泡  这是什么原因？

这个比例下因为使得流动相黏度最大，所以最容易产生气泡了，一般我们设计洗脱程序都避开这个比例。
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有水有渝
xky0230699
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2010/7/26 20:11:56 60楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
　请问：资料显示：在正常条件下，填料粒度＞20µm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒＜20µm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：①高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；②径向加压法，Waters专利；③轴向加压法，主要用于装填大直径柱；④干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。为什么以20um为分界点？填料方法的前三种都是湿法吗，能不能对四种填充方法做一个简短的说明？谢谢！
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2010/7/26 20:14:25 Last edit by xky0230699
xingwangyang
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2010/7/26 20:16:43 61楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在用液相测定多肽样品时遇到下列问题
1.流动相是A1％三氟乙酸水溶液，B1％三氟乙酸乙腈溶液  波长210  平衡时间太长 基线波动很大  是什么原因？怎么改善？
2.用过后的C18柱怎么清洗比较好。
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2010/7/26 20:19:01 Last edit by xky0230699
有水有渝
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2010/7/26 20:18:04 62楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


请问：如果不使用不锈钢接头，而改用ＰＥＥＫ头，是否可以完全解决接头匹配问题？
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xue2009
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2010/7/26 20:25:09 63楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xingwangyang(xingwangyang) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在用液相测定多肽样品时遇到下列问题
1.流动相是A1％三氟乙酸水溶液，B1％三氟乙酸乙腈溶液  波长210  平衡时间太长 基线波动很大  是什么原因？怎么改善？
2.用过后的C18柱怎么清洗比较好。

我认为是三氟乙酸含有杂质的问题，再有可能就是柱子被污染了，平衡时不断有杂质洗脱除，建议你把柱子好好冲洗看看
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有水有渝
xky0230699
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2010/7/26 20:34:26 64楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。那么，你们在使用说明书中会说明前后筛板的孔径吗？
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2010/7/26 20:34:53 Last edit by xky0230699
有水有渝
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2010/7/26 20:40:54 65楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yongzhbenq(yongzhbenq) 发表:
原文由 xue2009(xue2009) 发表:
4）流动相中加入适量的四氢呋喃
    往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度，很多色谱工作者都知道和使用，但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5％以内即可，需要的时候可以加入更大的量。

请问LZ，这个机理是什么呢？我有和别人交流过：向流动相中加异丙醇，四氢呋喃可以提高流动相的溶解度，改善峰型等等，原因我现在只是知道这些物质的洗脱能了更强。

《高效液相色谱方法及应用》于世林编著的上面说：乙腈为质子给予体、甲醇为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂，应该除了极性影响，还有另外的影响因素，至于分离机理，还是比较复杂的，不能看成是个万能方法


这个应该说反了吧？乙腈为质子接受体、甲醇为质子给予体
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xingwangyang
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2010/7/26 20:43:48 66楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我在做多肽药物时遇到下列问题
        1. 基线不稳定波动大 流动相  A  ：1％TFA水溶液  B:1％TFA乙腈溶液  检测波长210nm  流速：1.0ml/ml  什么原因？怎么解决？TFA有什么作用？
            流动相中不加TFA见不到主峰，基线良好。
          2.  做完肽类样品时  怎么冲洗C18比较好？
        3. 药典上介绍测定分子量大于2000的样品，选择柱子填料的孔径为30nm，30nm与10nm对结果有什么区别
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