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主题：【求助】延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离？

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zhangcsno114
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发表于：2010/09/30 09:56:32 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
PP-HPLC无法分开

研究对象是动物组织的一种分子量约为10KD的蛋白（通过 SDS-PAGE检测判定的分子量，尚未鉴定无法确定该蛋白是否有报道），具体分离纯化过程所用的是酸性缓冲液，目的是通过RP-HPLC纯化得到高纯度的样品进行鉴定。有空白运行梯度排除了梯度峰，Simadzu VP-ODS C18,4.6×150mm ,5μm柱子。1ml/min 流动相A:0.1%TFA 水溶液，流动相:0.08%TFA 乙腈溶液。10%A 平衡5min,30min内梯度到60%B。延长梯度时间、更换长柱子均无法得到很好的分离。改善梯度条件（在10%A 平衡5min,55min内梯度到60%B，90%B 5min 10%A 5min）峰型同前，降低进样浓度，换长柱子也没有改善。
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2010/9/30 10:19:35 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用RP-HPLC的保留时间是多少，能用GPC吗？
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2010/9/30 10:31:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
那你换一种填料的珠子呢？是不是这种填料不适合？
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2010/9/30 15:52:10 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
10KD的大分子用C18好像不合适
建议换成C8或者C4的柱子可能会好些
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2010/9/30 17:01:19 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也觉得应该换GPC的柱子，至少换成300A的柱子吧
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juegen
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2012/8/11 9:38:09 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我也觉得应该换GPC的柱子，至少换成300A的柱子吧
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