主题：【第六届原创】HPLC波长程序分析合成着色剂

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xydell

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发表于：2011/08/10 14:56:18 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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摘要：采用高效液相色谱法，配单波长紫外检测器，采用波长程序方法，参考《GB/T 21916-2008水果罐头中合成着色剂的测定》及《GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定》对柠檬黄、苋菜红等7种人工合成色素进行分析，获得良好的分离效果，最小检测浓度和线性范围均在要求范围内，与DAD检测器达到同等的分析效果。

《GB/T 21916-2008水果罐头中合成着色剂的测定》及《GB/T 5009.35-2003食品中合成着色剂的测定》均采用的液相色谱法分析合成着色剂，但GB/T 5009.35-2003中使用的是紫外检测器，检测波长254nm，而GB/T 21916-2008规定用DAD检测器，选择柠檬黄428nm、苋菜红521nm、靛蓝608nm、胭脂红509nm、日落黄483nm、诱惑红507nm、亮蓝625nm，其中胭脂红、日落黄、亮蓝的检出限优于GB/T 5009.35-2003。考虑到紫外检测器在价格及普及程度较DAD有优势，一般的紫外检测器也具有波长程序功能，如果能用一般的紫外检测器获得与DAD类似的检测效果，对合成着色剂的检测方法推广有实际的意义。

一、实验部分

1.1 仪器与试剂

LC1620液相色谱仪，配紫外检测器

FA2004电子分析天平

甲醇，色谱纯

二次蒸馏水

乙酸铵，色谱纯

色素样品：柠檬黄（95%），苋菜红（85%），靛蓝（98%），胭脂红（99%），日落黄（87%），诱惑红（85%），亮蓝（85%）

1.2 色谱条件

色谱柱：Shodex 120-5-4E C18，4.6*250mm，5um

流动相：A：0.02mol/l乙酸铵水溶液；B：90%甲醇水溶液，梯度洗脱（参照GB/T 21916-2008）
流速：1ml/min

1.3 样品溶液准备

准确称取按色素样品纯度折算为100%质量的柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝各1.000g，置于100ml容量瓶中，加水至刻度，配制成1000ug/ml储备液。

临用时将储备液用水稀释至0.1，0.2，0.4，1.0,，3.0，5.0ug/ml的系列溶液，经0.45微孔滤膜过滤，作为待测溶液。

1.4 样品测试

按色谱条件进样分析样品，进样量为20ul。

二、结果与讨论

1、我们比较了检测波长254nm条件下与GB/T 21916-2008中规定DAD选择波长条件下，相同浓度各个组分的响应情况，发现拧檬黄、苋菜红在254nm下响应更好；日落黄、诱惑红、亮蓝在波长程序条件下响应更好，尤其是亮蓝，响应值提高了10倍以上；靛蓝、胭脂红在两种条件下响应差别不大（如图1、图2）。因此，最后选择在254nm下检测拧檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红，待其出峰之后再改变波长检测日落黄、诱惑红、亮蓝（如图3）。

图1 检测波长254nm条件下7种着色剂的色谱图（浓度10ug/ml）

图2 参考GB/T 21916-2008波长程序条件下7种着色剂的色谱图（浓度10ug/ml）

图3波长程序条件下7种着色剂的色谱图（浓度5ug/ml）
2、分别进不同浓度样品，用保留时间考察其重复性，结果见表1。表2为不同浓度各组分的峰面积，根据峰面积和浓度作线性回归，得到标准曲线和相关系数（图4），线性关系良好。

图4 7种着色剂标准曲线
柠檬黄：y = 6034.8x - 80.327 R² = 0.9997

苋菜红：y = 4047.4x + 24.426 R² = 0.9993

靛蓝：y = 3496.1x - 20.141 R² = 1

胭脂红：y = 4501.8x - 112.8 R² = 0.9999

日落黄：y = 8208.5x - 171.47 R² = 0.9999

诱惑红：y = 5277.5x - 5.5254 R²= 1

亮蓝：y = 6014.9x + 525 R² = 0.9997

3、根据噪声值并参照GB/T 21916-2008的前处理方法，按照3倍信噪比计算检出限为柠檬黄0.27mg/kg、苋菜红0.30 mg/kg、靛蓝0.30 mg/kg、胭脂红0.27 mg/kg、日落黄0.10 mg/kg、诱惑红0.12 mg/kg、亮蓝0.05 mg/kg，满足国家标准的规定。

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