时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 95 | 5 |
5 | 90 | 10 |
15 | 70 | 30 |
20 | 70 | 30 |
25 | 95 | 5 |
35 | 95 | 5 |
耐用性研究项目 | 试验方法的条件 | 确认的耐用性范围 | |
流动相 | 流动相B(含水情况) | 比例为95:5(乙腈-水) | 应控制水分 |
流动相A组分pH值变化 | pH值:1.8、2.0、2.2 | ±0.2 | |
流动相A磷酸盐浓度 | 0.095~0.105mol/L | 0.10±0.005mol/L | |
流动相A SDS浓度 | 0.0171~0.0189mol/L | 0.018±0.009mol/L | |
流动相A组分比例 | 每个组分±5%变化 | 每个组分±5%变化 | |
流速(活性成分的保留时间变化) | 0.95~1.20ml/min | 1.0±0.05ml/min | |
色谱柱温度 | 室温 | 无相关研究 | |
检测波长 | 225nm | 220nm~225nm |
试验结果色谱图(225nm±5nm)
225±5nm有关物质检查结果
波长(nm) | 峰面积归一化法(%) | 阿莫西林峰面积 | 双氯西林钠峰面积 |
225nm | 98.346 | 2973049 | 2070214 |
220nm | 98.063 | 2954675 | 2323686 |
230nm | 98.854 | 2963646 | 1360435 |
试验结果表明,检测波长波动对双氯西林钠的检测响应值有较大影响,在220nm~225nm之间波动,影响较小;阿莫西林检测响应值影响较小。
备注:色谱图从上至下顺序分别为:样品(225nm)、样品1(220nm)、样品2(230nm)。
流速变化试验结果色谱图
流速变化试验结果
流速(ml/min) | 两成分主峰分离度 |
1.0 | 3.939/5.797 |
0.95 | 3.963/5.550 |
1.05 | 3.897/5.597 |
1.25 | 3.617/3.627 |
流动相B比例变化试验结果色谱图
流动相B比例变化试验结果
流动相B | 两组份主峰分离度 | 理论板数 |
乙腈:水(100:0) | 3.939/5.797 | 2388/10265 |
乙腈:水(95:5) | 5.700/3.399 | 2736/5736 |
流动相组分比例变化试验结果色谱图
流动相B组分pH值变化试验结果
pH值 | 两组份主峰分离度 |
2.0 | 3.939/5.797 |
1.8 | 3.752/3.616 |
2.2 | 4.979/2.282 |
流动相组分A磷酸盐浓度变化试验结果色谱图
备注:色谱图从上至下顺序分别为:样品(0.1mol/L磷酸二氢钾溶液)、样品9(0.095mol/L磷酸二氢钾溶液)、样品10(0.105mol/L磷酸二氢钾溶液)。
流动相组分A磷酸盐浓度变化试验结果
磷酸二氢钾浓度(mol/L) | 两组份主峰分离度 |
0.1 | 3.939/5.797 |
0.095 | 5.948/2.412 |
0.105 | 4.510/2.970 |
十二烷基硫酸钠浓度变化试验结果色谱图
备注:色谱图从上至下顺序分别为:样品(0.018mol/L)、样品11(0.0171mol/L)、样品12(0.0189mol/L)。
十二烷基硫酸钠(SDS)变化试验结果
十二烷基硫酸钠浓度(mol/L) | 两组份主峰分离度 |
0.018 | 3.939/5.797 |
0.0171 | 4.941/6.185 |
0.0189 | 4.731/6.587 |
流动相B主峰比例变化试验结果色谱图
流动相B组分比例变化试验结果
样品序号 | KH2PO4:SDS:甲醇:乙腈 | 两组份主峰分离度 |
13 | 262:275:200:250 | 4.115/6418 |
14 | 289:275:200:250 | 4.253/3.332 |
15 | 275:262:200:250 | 4.127/6.618 |
16 | 275:289:200:250 | 4.424/6.476 |
17 | 275:275:190:250 | 4.795/4.778 |
18 | 275:275:210:250 | 4.312/5.960 |
19 | 275:275:200:238 | 4.920/1.598 |
20 | 275:275:200:262 | 4.652/5.468 |