主题:【第六届原创】【极限体验】盐酸坦洛新缓释片含量测定方法学

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东风恶
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项目:含量测定(3.2.P.5.2.7)

检查方法:照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录 D)测定

试验条件:

色谱柱(柱长:150mm,内径:4.6mm,填料:C18,填料粒径:5μm)



UV检测器(检测波长:225nm)

柱温:30℃

流动相:0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈(7:7:5)

流速:1.0ml/min

运行时间:约25分钟

系统适用性:理论板数按盐酸坦洛新峰计算不低于2000。

具体试验操作:取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于盐酸坦洛新0.2mg),置50ml量瓶中,加流动相适量振摇后超声使溶解,放冷至室温,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪中,记录色谱图;另精密称取盐酸坦洛新对照品2mg置50ml量瓶中,加流动相振摇后超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为对照品溶液,精密量取对照品溶液20μl注入液相色谱仪中,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,即得。

计算公式:

标示量百分含量(%)=××100%

式中:Cs为对照品的浓度(mg/ml);

At为供试液的主峰面积;

Nt为供试液的稀释倍数;

AS为对照品溶液的主峰面积;

W为供试品取样量(mg)。

3.2.P.5.3.5含量测定

含量测定方法学验证结果概要



项目


验证结果


波长选择


225nm


流动相选择


0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈(7:7:5)。


进样精密度试验


连续测量6次,主峰保留时间和峰面积RSD均小于2.0%。


线性关系试验


浓度在2460ng/ml~5740ng/ml,直线方程为y=107.8x﹢5880.1,R2=0.9992,相关系数r=0.9996,截距为5880,小于100%浓度溶液主峰面积的2.0%(8841)。


溶液稳定性试验


室温条件下置12个小时,测得峰面积的RSD为1.3%


回收率试验


平均回收率为100.3%,在98.0%~102.0%范围内,RSD为1.0%(n=9),小于2.0%。


重复性试验


试验结果在95.3%~100.5,RSD值为2.0%。


耐用性


同有关物质项


含量测定结果


上市品和自制品均符合规定


3.2.P.5.3.5.1波长选择

参照盐酸坦洛新缓释片药品质量标准YBH19552005含量测定项、盐酸坦洛新原料药质量标准YBH03262005有关物质项和本品有关物质研究试验结果,检测波长选定为225nm。

3.2.P.5.3.5.2流动相选择(色谱图见附件941~955)

参照盐酸坦洛新缓释片药品质量标准YBH19552005和原料药质量标准YBH03262005中流动相体系。

流动相体系

编号

流动相组成体系及试验条件

1-1



乙腈-甲醇-磷酸溶液(取三乙胺、磷酸各1ml,加水至200ml)(20:30:50),检测波长223nm。

1-2



乙腈-甲醇-磷酸溶液(取三乙胺、磷酸各1ml,加水至200ml)(15:30:55),检测波长223nm。

1-3



乙腈-甲醇-磷酸溶液(取三乙胺、磷酸各1ml,加水至200ml)(10:15:75),检测波长223nm。

1-4



乙腈-甲醇-磷酸溶液(取三乙胺、磷酸各1ml,加水至200ml)(10:30:60),检测波长223nm。

2



0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈(7:7:5),检测波长225nm。



备注:流动相1-1~1-4参考盐酸坦洛新缓释片药品质量标准YBH19552005;

流动相2参考盐酸坦洛新原料药质量标准YBH03262005。

参照上述流动相体系,进行含量测定流动相选择试验。结果见下表图:

流动相选择试验结果

编号

试验项目

主峰保留时间(min)

拖尾因子

主峰面积

分离度

理论板数

备注

1-1.

样品1

4.906

1.111

240352

7.711

4363

样品2

4.887

1.117

288876

5.783

4364

1-2.

样品

4.778

1.189

197253

6.274

3999

1-3.

样品

32.705

1.018

186682

20.778

5969

1-4.

样品

10.172

1.102

1264110

12.311

5086

2.

样品1

13.368

1.044

1729155

7.493

11211

2.

样品2

13.369

1.041

1446237

7.247

11075

2.

样品3

14.235

0.887

807624

1.790

7339

2.

样品4

14.302

1.034

898923

1.824

10809

2.

样品5

14.350

1.029

1091913

1.938

11713

2.

样品6

14.351

1.025

935584

2.036

11859

2.

样品7

14.316

1.153

6077271

1.817

11494

2.

样品8

14.300

1.088

3518863

1.850

11877

2.

原料药

13.014

2.205

47090198

4.473

6716



备注:表格中“-”为未统计或无内容。

试验结果典型色谱图:

编号1-1.色谱图(见附件941~942)



备注:色谱图从上至下信息为样品1、样品2。

结果表明,盐酸坦洛新主峰保留时间为5分钟,较溶剂峰近,基线漂移较大。

编号1-2.试验结果(见附件943~944)


原料药供试液色谱图信息

峰#

名称

保留时间

面积

拖尾因子

分离度

理论塔板#

面积%

1

溶剂

2.904

41802

2.187

-

1547

17.347

2

盐酸坦洛新

4.778

197253

1.189

6.274

3999

81.858

3

杂质

12.854

1914

1.306

18.737

8437

0.794



试验结果表明,溶剂峰和盐酸坦洛新主峰保留时间较近,此流动相溶解样品前处理较难溶,不适合含量测定。

编号1-3.试验结果(见附件945)


原料药供试液色谱图信息

峰#

名称

保留时间

面积

拖尾因子

分离度

理论塔板#

面积%

1

溶剂

2.782

12183

-

-

1231

4.9129

2

-

3.054

40872

2.175

1.060

3924

16.4825

3

-

4.039

2006

-

5.641

10959

0.8090

4

-

4.162

4724

-

0.470

2043

1.9051

5

-

9.534

1506

0.745

11.867

5041

0.6073

6

盐酸坦洛新

32.705

186682

1.018

20.778

5969

75.2832



试验结果表明,此流动相溶解样品前处理较难溶,不适合含量测定。

编号1-4.试验结果(见附件946)


原料药供试液色谱图信息

峰#

名称

保留时间

面积

拖尾因子

分离度

理论塔板#

面积%

1

溶剂

2.563

2957

-

-

196

0.2166

2

溶剂

2.811

9345

-

0.313

174

0.6844

3

溶剂

3.011

51823

-

0.341

1399

3.7956

4

-

3.308

13605

-

0.137

10

0.9964

5

-

3.578

11623

-

0.115

437

0.8513

6

-

3.847

9208

--

0.509

1693

0.6744

7

-

4.339

2685

--

1.312

2119

0.1967

8

盐酸坦洛新

10.172

1264110

1.102

12.311

5086

92.5846



试验结果表明,此流动相溶解样品前处理较难溶,不适合含量测定。

编号2.样品1试验结果(见附件947)


样品1供试液色谱图信息

峰#

名称

保留时间

面积

拖尾因子

分离度

理论塔板#

面积%

14

盐酸坦洛新

13.368

1729155

1.044

7.493

11211.650

94.3531



备注:取盐酸坦洛新缓释片1片,置10ml量瓶中,加2ml甲醇,振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度。

试验结果表明,此流动相适合含量测定。

编号2.样品2~样品6试验结果(见附件948~955)

供试液制备:

样品2:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.0506g,置10ml量瓶中,加5ml甲醇,振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品3:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.0502g,置10ml量瓶中,加5ml甲醇,振摇,超声使溶解,加甲醇稀释至刻度;

样品4:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.0503g,置10ml量瓶中,加7ml甲醇,振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品5:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.0507g,置10ml量瓶中,加2ml甲醇,振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品6:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.0505g,置10ml量瓶中,加流动相振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品7:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.5041g,置10ml量瓶中,加流动相振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品8:取盐酸坦洛新缓释片细粉0.2512g,置10ml量瓶中,加流动相振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

样品9:取盐酸坦洛新原料药0.00534g,置10ml量瓶中,加流动相振摇,超声使溶解,加流动相稀释至刻度;

原料药供试液色谱图信息

样品

名称

保留时间

面积

拖尾因子

分离度

理论塔板#

面积%

2

盐酸坦洛新

13.369

1446237

1.041

7.247

11075.431

65.3408

3

盐酸坦洛新

14.235

807624

0.887

1.790

7339.871

85.7722

4

盐酸坦洛新

14.302

898923

1.034

1.824

10809.272

97.6813

5

盐酸坦洛新

14.350

1091913

1.029

1.938

11713.496

83.2610

6

盐酸坦洛新

14.351

935584

1.025

2.036

11859.015

92.2088

7

盐酸坦洛新

14.316

6077271

1.153

1.817

11494.955

93.8650

8

盐酸坦洛新

14.300

3518863

1.088

1.850

11877.850

92.2367

9

盐酸坦洛新

13.014

47090198

2.205

4.473

6716.910

99.9549



备注:色谱图从上至下信息为样品2~样品9。

以上试验结果表明,采用流动相体系为乙腈-甲醇-磷酸溶液(取三乙胺、磷酸各1ml,加水至200ml),盐酸坦洛新主峰保留时间和溶剂峰较近或出峰时间较较迟;而采用流动相体系为0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈,盐酸坦洛新主峰保留时间在约14分钟,且流动相能较好溶解样品,适合含量测定。

3.2.P.5.3.5.3进样精密度试验(色谱图见附件956~961)

精密称取盐酸坦洛新原料药(批号:YK1111001)0.00820g,置100ml量瓶中,用流动相适量超声使溶解,放冷至室温,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液5ml,置100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试液,精密量取供试液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,重复操作6次。试验结果见下表。

精密度试验结果

进针次数

1

2

3

4

5

6

平均

RSD%

保留时间(min)

14.055

14.083

14.081

14.088

14.109

14.095

14.085

0.1

主峰面积(A)

436349

445253

446141

445474

446024

447429

444445

0.9



试验结果表明,连续测量6次,主峰保留时间和峰面积RSD%均小于2.0%,进样精密度符合要求。

3.2.P.5.3.5.4含量测定线性关系试验(色谱图见附件962~966)

精密称取对照品(规格:50mg,批号:100688-200401,含量:100.0%)0.00820g,置100ml量瓶中,用流动相适量超声使溶解,放冷至室温,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液3、4、5、6、7ml分别置于100ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试液。取上述供试液各20µl注入液相色谱仪,记录色谱图。试验结果见下表。

线性关系试验结果

浓度(%)

60%

80%

100%

120%

140%

浓度(ng/ml)

2460

3280

4100

4920

5740

峰面积(A)

272671

362044

442069

533835

628774



试验结果经线性回归分析,浓度在2460ng/ml~5740ng/ml,直线方程为y=107.8x﹢5880.1,R2=0.9992,相关系数r=0.9996,截距为5880,小于100%浓度溶液主峰面积的2.0%(8841),表明线性关系试验符合要求。

3.2.P.5.3.5.5溶液稳定性试验(色谱图见附件967~973)

取本品(规格:0.2mg,批号:20120401)细粉0.1327g,置50ml量瓶中,用流动相适量超声使溶解,放冷至室温,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液在室温条件下放置12h,分别于0、2、4、6、8、10、12h取上述溶液各20µl注入液相色谱仪,记录色谱图。试验结果见下表。

溶液稳定性试验结果

时间

0h

2h

4h

6h

8h

10h

12h

平均值

RSD

峰面积

360813

361077

363528

369365

371544

370178

370921

366775

1.3%



本品的流动相溶液在室温条件下置12个小时,测得主峰面积的RSD为1.3%,小于2.0%,试验结果表明盐酸坦洛新供试液较稳定。

3.2.P.5.3.5.6回收率试验(色谱图见附件974~994)

按70%、100%、130%的份量,各精密称取盐酸坦洛新(含量:99.0%,水分0.05%)三份,按处方量加入混合辅料约1.29g,分别置50ml量瓶中,加流动相适量超声使溶解,放冷至室温,用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,分别精密量取续滤液1ml置10ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液,各取20µl注入液相色谱仪,记录色谱图。试验结果见下表。

回收率试验测定结果

标示量

加入量(mg)

测得量(mg)

回收率(%)

平均值(%)

RSD(%)

70%

1.48

1.485

100.3

100.3

1.0%

1.47

1.470

100.0

1.49

1.484

99.6

100%

2.09

2.096

100.3

2.05

2.048

99.9

2.09

2.109

100.9

130%

2.61

2.572

98.5

2.75

2.800

101.8

2.73

2.775

101.6



试验结果表明,平均回收率为100.3%,在98.0%~102.0%范围内,RSD为1.0%(n=9),小于2.0%,回收率符合含量测定方法验证要求。

3.2.P.5.3.5.7重复性试验(色谱图见附件995~1010)

精密称取本品(规格:0.2mg,批号:20120401)细粉6份,分别置50 ml量瓶中,加流动相适量振摇后,超声使溶解,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20µl注入液相色谱仪,记录色谱图。试验结果见下表。

重复性试验结果(%)

1

2

3

4

5

6

平均值

RSD

95.83

96.87

95.33

100.62

96.28

96.35

96.9

1.97



试验结果表明,重复性试验结果在95.3%~100.5%,RSD值为2.0%,符合重复性试验要求。

3.2.P.5.3.5.8含量测定方法的确定

根据含量方法学试验结果并参照盐酸坦洛新原料药质量试行标准YBH03262005有关物质项和盐酸坦洛新缓释片质量标准YBH19552005含量项,确定本品含量测定方法如下:

照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录Ⅴ D)测定。

色谱条件与系统适用性试验 用十八烷键合硅胶为填充剂;0.2mol/L磷酸二氢钾-0.2mol/L磷酸-乙腈(7:7:5)为流动相,检测波长为225nm,理论塔板数按盐酸坦洛新峰计算,应不低于2000。

测定法取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于盐酸坦洛新0.2mg),置50ml量瓶中,加流动相适量振摇后超声使溶解,放冷至室温,加流动相稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液20μl注入液相色谱仪中,记录色谱图;另精密称取盐酸坦洛新对照品2mg置50ml量瓶中,加流动相振摇后超声使溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液1ml置10ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,作为对照品溶液,精密量取对照品溶液20μl注入液相色谱仪中,记录色谱图。按外标法以峰面积计算,即得。

3.2.P.5.3.5.9含量测定色谱条件耐用性

因本品含量测定与有关物质检查色谱条件一致,耐用性试验结果见有关物质方法学验证项3.2.P.5.3.2.9耐用性试验项。

3.2.P.5.3.5.10含量测定结果

参照中国药典2010年版二部对制剂含量限度的一般要求,并结合本品含量测定结果,将本品含量限度拟定为:本品含盐酸坦洛新(C20H28N2O5S•HCl)应为标示量的90.0%~110%。取本品各批,按上述方法对自制品和上市样品进行检测,结果均符合规定,结果见下表。

含量测定结果(%)

批号

测定结果

含量测定色谱图编号

含量均匀度色谱图编号

20120401

96.9

995~1010

1031~1054

20120701

99.8

1011~1018

1055~1078

20120702

100.3

1019~1022

1079~1103

20120703

99.4

1023~1026

1104~1127

120201

99.8

1027~1030

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数据和方法过程写的真全啊!
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感谢楼主的好帖!
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东风恶
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原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
本实验有没有使用月旭的柱子啊?


有的。
samanthalas
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原文由 东风恶(luoleqc) 发表:
原文由 samanthalas(samanthalas) 发表:
本实验有没有使用月旭的柱子啊?


有的。


看到了,楼主补充了柱子实物的照片.

以后发表极限体验, 要增加一个条件哦:

就是最好登上柱子照片,或者备注一下柱子的序列号,就是柱子标签上的Serial No.
雪妖
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很系统很详细,很有参考价值的一个帖子,很感谢楼主的分享
不同的柱子之间的差异选择过吗?
不过一般西药的含测是不是一般的柱子都比较好做呢?
这个项目有关物质也是用的我们的这款柱子吗?能不能分享一个有关物质的色谱图呢?O(∩_∩)O~
东风恶
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原文由 雪妖(czj_1027) 发表:
很系统很详细,很有参考价值的一个帖子,很感谢楼主的分享
不同的柱子之间的差异选择过吗?
不过一般西药的含测是不是一般的柱子都比较好做呢?
这个项目有关物质也是用的我们的这款柱子吗?能不能分享一个有关物质的色谱图呢?O(∩_∩)O~


透明
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zhw19811005
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