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主题：【第六届原创】饲料中铜、铁、锰和锌含量检测细则与方法验证

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fengxueyixiao
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x射线仪器发表于：2013/07/27 15:56:53 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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饲料中铜、铁、锰和锌含量检测细则与方法验证

fengxueyixiao





1. 目的

    为了规范饲料中铜、铁、锰和锌含量的测定，特根据标准GB/T 13885─2003 饲料中铜、铁、锰和锌含量的测定原子吸收光谱法（本检测中心标准受控编号为：XXXX-29）制定本检验细则，并通过方法验证证明本方法的适合实验室检测要求

2. 范围

    本细则（操作流程）适用于所有动物饲料中铜、铁、锰和锌的测定。本方法检出限为铜，铁，锰，锌：5 mg/Kg（根据国标方法规定的，其实按照现在实验条件，检出限要低得多，详见方法验证内容）。

3．原理

    将试料放在马弗炉550℃±15℃温度下灰化之后，用盐酸溶解残渣并稀释定溶，然后导入原子吸收分光光度计的空气-乙炔火焰中。测量每个元素的吸光度，并与同一元素校正溶液的吸光度比较定量。



5. 作业内容

5.1 试剂配制

5.1.1盐酸溶液：c（HCl）= 6 mol/L，在2L的大烧杯中加入500mL超纯水，再加入500mL优级纯盐酸，用玻璃棒搅拌均匀，即可。

5.1.2 Cu、Fe、Mn、Zn的标准溶液：

    用移液枪吸取1mL标准储备溶液（1000μg/mL）加入100mL容量瓶中，加入5mL浓盐酸，再用超纯水稀释定容制成Cu、Fe、Mn、Zn的含量为10μg/mL(也可以配Fe含量为20μg/mL)。

注：所有试剂均使用优纯级，实验用水符合GB/T 6682-2008一级用水。

5.2 仪器设备

5.2.1分析天平：称量精度到0.1mg。

5.2.2 瓷坩埚：内层光滑没有被腐蚀，使用前用10%硝酸溶液浸泡至少24h，使用前用6mol/L盐酸煮沸30min。

5.2.3 所有容器，包括配制校正溶液的吸管，使用前用10%硝酸溶液浸泡至少24h，使用前用0.6mol/L盐酸冲洗,再用超纯水冲洗。

5.2.4 电热板和电炉

5.2.5 马弗炉：温度能控制在550℃±15℃。

5.2.6 原子吸收分光光度计：日立Z-2000型原子吸收分光光度计，带有空气-乙炔火焰。

5.2.7 测定Cu、Fe、Mn、Zn所用的空心阴极灯。

5.3 样品制备

5.3.1 样品

    根据估计含量称取1g~5g制备好的试样（猪饲料，鱼饲料，鸭饲料一般称样量为1g），放进坩埚中（5.2.2）。

    如果试料含有机物，按（5.3.2）操作(一般饲料成品都含有机物，判断是否含有机物可以取少量样品，放到坩埚中，在电炉上炭化，如果有浓烟冒出，样品颜色和形态发生改变，则含有机物，否则不含有机物)

    如果试料不含有机物（如矿物样品，氧化锌、硫酸铜之类），按（5.3.3）操作。

5.3.2 干灰化

    用手轻拍坩埚侧面使样品平铺在坩埚底部，将坩埚放在电炉（5.2.4）上，电炉调到大概2/3量程，低温炭化至无白色烟为止（完全炭化并避免试样燃烧）。将坩埚放入马弗炉（5.2.5）中，将马弗炉温度设置为550℃，保持灰化4h，冷却后用约2mL水浸润内容物。如果有许多炭粒，加入3~5滴浓硝酸后将坩埚放在电热板上干燥，然后放到电炉上炭化，再放到马弗炉中灰化1h，让其冷却再加2mL水浸润内容物。

5.3.3 溶解

    取10mL盐酸（5.1.1），开始慢慢一滴一滴加入，边加入边旋转坩埚，直到不冒泡为止，然后再迅速放入，不时旋动坩埚，并在电热板（5.2.4）上140℃~150℃间加热，直到内容物近乎干燥（呈湿盐状），加热期间务必避免内容物溅出（在140℃~150℃间加热，样品一般不会溅出，如果温度过高，样品容易沸腾溅出，而且需要避免使用底部很薄的坩埚，因为这种坩埚也特别容易在加热到近干时，样品沸腾溅出），用5mL盐酸（5.1.1）加热溶解残渣，冷却后分次用5mL水将试料转移到50mL容量瓶，转移中注意用玻璃棒刮干净粘附坩埚内部的附着物，避免待测物质损失，用水稀释定容，静置一段时间后，直接取上清液上机测定。

5.3.4 空白溶液

    每次测量，均按照5.3.1-5.3.3步骤制备空白溶液（空白溶液指除了不加样品以外，其余试剂加入量和处理样品时相同）。

5.4 样品测试

5.4.1 测量条件

    按照仪器默认条件，或按仪器说明要求调节原子吸收分光光度计（5.2.6）的仪器条件，使其灵敏度在最佳状态（同时测定铜、铁、锰、锌时，将锌设置在第一位，因为锌容易受到污染，为了防止雾化室中有样品残留等，故设置锌为第一位测定元素）。

5.4.2 标准曲线制备

    稀释标准溶液（5.1.2）并使最终溶液为5%（(v/v)盐酸溶液，配制一组适宜的校正溶液。一般现在使用的标准曲线为取0、0.5、1、2、4、5mL10μg/mL Cu、Fe、Mn、Zn的标准溶液加入到50 mL容量瓶中，再加入5mL盐酸（5.1.1），用超纯水定容，得到浓度为0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0μg/mL Cu、Fe、Mn、Zn的标准系列溶液（标准曲线系列浓度可以根据样品大概含量和元素的灵敏度灵活调整）。

    测量各标准系列溶液的吸光度建立标准曲线，要求火焰法标准曲线线性相关系数r>0.9990。

5.4.3 样品溶液的测量

    在相同条件下，测量试料溶液和空白溶液，并用空白溶液校正(扣除样品空白值)。若样品溶液的浓度超出标准曲线最高点浓度，则需稀释样品溶液使其吸光度在标准曲线线性范围之内，最好落在线性范围的中部位置。



5.6  结果表示

    由标准曲线、样品的质量和稀释的倍数分别计算出Cu、Fe、Mn、Zn各元素的含量。

按照表1修约，并以mg/kg或g/kg表示。



    例如计算得到样品含量为98.735mg/kg，修约后的结果为9.9×10 mg/kg（相当于从左边起保留一位小数）。

5.7  精密度

5.7.1 重复性

    同一操作人员在同一实验室，用同一个方法使用同一设备对同一样品在短时间内所测得两个平行样之间的相对偏差不得超过表2或表3中规定的相对偏差值（a）



5.7.2 再现性

    不同分析人员在不同实验室，用不同设备使用同一个方法对同一个样品检测得到两个单独试验结果之间的相对偏差不得超过表2或表3中规定的相对偏差值（A）

    注：精密度依据GB/T 13885─2003 《饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠、和锌含量的测定》，将其中的重复性限（r）和再现性限（R）分别换算成重复性相对偏差（a）和再现性相对偏差(A)

6. 相关记录

  原始记录                                      XXXX/QM 04-Y005-2.0

  元素标准工作液配制记录表      XXXX/QM 04-Y020-2.0

7.  方法验证

7.1 标准曲线

    采用仪器对方法进行检验时，首先要建立样品和仪器之间的关系。通常采用标准曲线来表示，利用不少于5点（不包括原点）的实验数据算出待测物和仪器响应值之间的线性回归方程并计算相关系数（r）：以待测物的浓度（如µg/mL）为横坐标，响应值（吸光度）为纵坐标制作标准曲线，确定线性范围，线性相关系数应该大于0.9990。





7.2 检出限、定量限

7.2.1 检出限

    检出限用于考虑方法是否具备灵敏的检测能力。常根据检测对象、检测目的的不同对检测方法的检出限作出具体规定。

    根据原子吸收光谱法规定，光谱分析方法的检出限等于3倍样品空白的标准偏差（S）除以标准曲线斜率（a）得到的值（检出限(LOD) =3*S/a）。

7.2.2定量限

    定量限可确定为标准曲线的最低点浓度，或等于三倍检出限的浓度（定量限(LOQ)=3*检出限(LOD)）。



      在日常检测工作中，以标准曲线最低点浓度作为定量限。



7.3  精密度

    精密度：分析方法重复测定同一样品所得测定值间的一致程度。一般用相对标准偏差（RSD）来衡量，RSD越小，精密度越好。

取六个平行样品，测定其中的铜、铁、锰、锌含量，计算其相对标准偏差（RSD）。

7.3.1重复性





    注：本次测量样品为猪饲料，称样量约1g,定容至50mL，稀释10倍。

7.4  准确度

    准确度：样品中待测物测定值（结果）与被测量真值或约定真值间的一致程度，以误差来表示。它用来表示系统误差的大小。

    在实际工作中，通常用标准物质或标准方法进行对照试验，在无标准物质或标准方法时，常用加入被测定组分的纯物质进行回收试验来估计和确定准确度。在误差较小时，也可通过多次平行测定的平均值,作为真值µ的估计值。测定精密度好，是保证获得良好准确度的先决条件，一般说来，测定精密度不好，就不可能有良好的准确度。对于一个理想的分析方法与分析结果，既要求有好的精密度，又要求有好的准确度。

    本检测中心采用加标回收试验，标准物质测定和第三方检测机构结果比对来验证方法的准确性。

7.4.1加标回收试验





7.4.2标准物质测定



7.4.3与第三方检测机构结果比对



注：由于是与第三方检测机构比对结果，所以使用的是国标方法中规定的再现性相对偏差（A）。

8. 方法验证结论

    通过验证本方法的标准曲线、检出限、定量限、精密度、准确度，从验证结果可知本方法适合动物饲料中铜、铁、锰和锌的测定，能满足实验室对铜、铁、锰和锌的测试要求。

9. 参考文献

[1]  GB/T 13885─2003 《饲料中钙、铜、铁、镁、锰、钾、钠、和锌含量的测定》

[2]  GB/T 23182─2008《饲料中兽药及其他化学物检测试验规程》

[3]  GB/T 27404─2008《实验室质量控制规范食品理化检测》

      本检测细则和验证内容是本人和搭档共同完成的，由于本人才疏学浅，细则和方法验证内容中如有什么遗漏之处，特请各位版友和专家指出，以完善本检测细则，也可以分享各自验证方法的经验，共同成长。
该帖子作者被版主 qq250083771加 10积分， 2经验，加分理由：鼓励
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2013/7/27 16:44:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很完善啊  精密度 准确度都有  连实验室之间比对都有  牛啊
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尘
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2013/7/27 19:35:08 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一定得用瓷坩埚吗？聚四氟乙烯不行吗？
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zhw19811005
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2013/7/27 21:30:02 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
已经很完善了
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fengxueyixiao
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2013/7/27 22:20:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qq250083771(qq250083771) 发表:很完善啊  精密度 准确度都有  连实验室之间比对都有  牛啊
谢谢，其实也很正常，认可实验室是比需做的。
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2013/7/27 22:23:56 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 尘(fjh26) 发表:一定得用瓷坩埚吗？聚四氟乙烯不行吗？
用干灰化法处理样品，不能用聚四氟乙烯坩埚，会烧坏的。
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2013/7/27 22:27:17 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhw19811005(zhw19811005) 发表:已经很完善了
对于精密度测试，您觉得有必要做低、中、高浓度的不同样品吗？？
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abcpgf
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2013/7/27 23:48:47 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很全面的验证呀，很好的分享。
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fengxueyixiao
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2013/7/28 10:29:29 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 abcpgf(abcpgf) 发表:很全面的验证呀，很好的分享。
谢谢专家夸奖，我也是将日常的工作总结起来而已。你觉的需要做日间精密度吗？
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wmj31
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2013/7/28 14:12:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.7.1中 铜标1的吸光度能更大些更好，0.0030的吸光度还是偏低了些，不稳定。
2. 7.3的备注，本次测量为猪饲料，称约1g，定容到50ml，稀释10倍？觉得应是稀释50倍。
3.精密度可分为重复性，中间精密度（或者你在楼上的帖子所说的日间精密度），重现性。一般的方法验证还须包括中间精密度。
4.准确度中，各试液的试样浓度如何得到，没有说明，是用6个精密度的值平均得到还是？在回收率的的计算没有考虑称样量的差异？
该帖子作者被版主 ljhciq加 2积分， 2经验，加分理由：互动交流
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2013/7/28 15:34:42 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wmj31(wmj31) 发表:1.7.1中 铜标1的吸光度能更大些更好，0.0030的吸光度还是偏低了些，不稳定。2. 7.3的备注，本次测量为猪饲料，称约1g，定容到50ml，稀释10倍？觉得应是稀释50倍。3.精密度可分为重复性，中间精密度（或者你在楼上的帖子所说的日间精密度），重现性。一般的方法验证还须包括中间精密度。4.准确度中，各试液的试样浓度如何得到，没有说明，是用6个精密度的值平均得到还是？在回收率的的计算没有考虑称样量的差异？
王老师，这些问题明天我会一一回答，谢谢老师提出的各种疑问。
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