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液质联用（LCMS）

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主题：【第六届原创】由前处理起飞-----硝基呋喃代谢物（已更新完毕）

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sukiliang

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色谱发表于：2013/08/08 12:18:13 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被capinter设置为精华；

维权声明：本文为sukiliang原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

前言

在这个版已经混了快半年了！也看到有一些网友说硝基呋喃代谢物很难做，说实在的，开始接手液质没多久就要做硝基呋喃代谢物的期间核查，那时还真的什么都不懂，这个实验到底要怎么做？开始的时候连标线都做不出来，后来没多久才搞明白，标线终于做出来了，但是现在回收率只能算合格！望各位大侠指教。

硝基呋喃类药物很不稳定，很容易生成代谢物，由于代谢物比较稳定也有致癌作用，所以在食品安全的检测中检测硝基呋喃代谢物。

参考20752-2006的标准

= =！本来说好了水产那边要建实验室，我们再也不用做水产品的，但是某些人为了那顿饭，为了装好人把这条巴鱼接回来了，每次来一条鱼我就要做14个样品，悲催！

1.左边一排是标准曲线每个管子分别写着要配置的标准曲线的浓度，右边的是我的样品分别写着巴鱼1号，巴鱼2号，因为不是做委托实验我懒所以选择加那么高浓度的+5ng/ml，+5ng/ml*，+10ng/ml，+10ng/ml*

2.好了，偶们去称样了！

3.配置好的甲醇+水（2+1），吸取10ml加入试管中。这时候你会发现，本来透明的鱼肉会有点不透明的，因为蛋白质变性了（我记得有一次貌似没加这东西，过柱的时候出现悲催的情况。）

下面内个是一个称好的透明鱼肉

、

加入酸化甲醇后

= =！透明的肉肉立马变色，蛋白质变性了！

4.加完以后盖上盖子，在漩涡上震荡。

5.离心，在这里建议用高速冷冻离心，

（1）.鱼肉的纤维很细，时间一长就会松散掉。

（2）能使一些脂肪冻结

6.弃去离心完的液体，倒的时候要小心，否则连肉都倒出来！

7.每根管里面加入5ml 0.2mol/ml盐酸

8.开始加标了！同一时间标准曲线的那点也开始做了

算好自己最终需要的浓度，往管里加入标准品！

eg：偶最后定容到1ml，由于衍生后的液体，调ph后全部过柱，浓缩定容上机，没有稀释倍数so，把标准品稀释到0.1mg/L，0.5ppb的管内加入5ul，1ppb管中加入10ul，如此类推

然后就到均质刀头那打碎。

= =！这里地方窄，我们转移阵地！

开始打样！

9.再用5ml 0.2mol/ml盐酸冲洗刀头，如果冲洗不干净多加点都无所谓！

10.加衍生剂！---先说说秤衍生剂，我每次秤的时候都不会秤得很准，标准上是0.075g溶于10ml，每次我都是秤到差不多0.9几，衍生剂多了应该没关系，作用是衍生而已嘛，二甲亚砜依然是10ml。

好了，关灯作业。

每个样品加入0.5ml的衍生剂，标准上是0.3ml，还是内句，加多了没关系！

37摄氏度水浴避光衍生。

11.第二天回来后，加入5ml 0.1mol/l磷酸氢二钾，然后调ph

调ph的时候一定要注意，尽量不能调过头了，影响回收率！不知道是不是我们的ph计有问题，每次调到4点多的时候，就开始要一滴滴来调了，每次到四点多的时候加一滴会上得很快的。

12.调完ph后、高速冷冻离心

注意，离心完以后要迅速转移到另外一根干净离心管里，否则时间一长会出现以下情况，肉全都浮起来了。又要重新离心！

、

13.过柱

HLB柱子——3ml甲醇活化——6ml水平行——所有样品移到柱子——用水清洗一次离心管，把剩下的也倒入管内——6ml的水平行——吹干——6ml乙酸乙酯洗脱。

过完样品的时候，建议用水清洗以下离心管，再加入柱子里，尽量让管里残留的药物洗出。

、

14.氮气吹干

15.初始流动相定容。漩涡震荡

16过膜上机！

楼主最近发现一样很好玩的样品瓶！自带滤膜的样品瓶。

写好一系列的编号。

把试管的溶液倒到写好编号的样品瓶里，样品倒到刻度线就可以了！

把样品瓶的第二部分拿出来

第二部分的底部是一个滤膜来的！

、

把第二部分压进去

既能过膜，同时也可以上机了！

仪器条件

小结：

由于内标还在路上，so此次样品没加入内标。but，通过这次试验看到sem和aoz的回收率相对很低！

= =!内标终于到了：

数据补上：

待测物的质谱条件（已加入内标参数）：表5-1

很奇怪，发现加入内标的情况貌似相反了，难道是我的问题？

不加内标的时候AMOZ的回收率还能见人，加入内标以后AMOz的就不怎么好了！

二、参考农业部标准783

线性范围和相关系数

在该试验条件下标准溶液的浓度在0.5、1、2、5、10、20、50ng/ml各取20ul进样，记录色谱图，线性方程和相关系数见表7。

表7 回归线性方程和相关系数

表8 回收率和精密度数据

使用内标后待测物的质谱条件详见表5-1

表9 使用内标的回归线性方程和相关系数

表10 回收率和精密度数据

最后附上离子流图

图1：加标的样品

AMOZ及其内标提取离子流图

AHD及其内标提取离子流图

SEM及其内标提取离子流图

AOZ及其内标提取离子流图

该帖子作者被版主新窦加 30积分， 2经验，加分理由：原创奖励

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2013/8/8 12:32:27 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

做得好详细啊，赞一个！前处理很关键，尤其是对于复杂基质。

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小丶风

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2013/8/8 13:32:13 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？
求品牌、货号及价格（方便的话）

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2013/8/8 13:32:58 Last edit by yujianlin

zhw19811005

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2013/8/8 15:27:18 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

非常详细的前处理过程

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pxqbear

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2013/8/8 15:35:03 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

步骤有些多楼主发现的小瓶子很神奇，对于大量需要过滤的样品来说是福音啊

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sukiliang

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2013/8/9 11:27:06 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小丶风(yujianlin) 发表:
楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？

求品牌、货号及价格（方便的话）

我们是用安家的液相！

我实验室也有水的液相，安家的玻璃的样品瓶也能用到水家的液相上，但是盖子使用带切口的盖子！

如果要把这种样品瓶用到水家的液相上最好要用有预切口的瓶盖！

样品瓶也是安家的，货号是5190-1416，价格比普通样品瓶要贵哦！貌似一千多一盒！

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小丶风

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2013/8/9 13:53:48 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 sukiliang(sukiliang) 发表:
原文由 小丶风(yujianlin) 发表:
楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？

求品牌、货号及价格（方便的话）

我们是用安家的液相！

我实验室也有水的液相，安家的玻璃的样品瓶也能用到水家的液相上，但是盖子使用带切口的盖子！

如果要把这种样品瓶用到水家的液相上最好要用有预切口的瓶盖！

样品瓶也是安家的，货号是5190-1416，价格比普通样品瓶要贵哦！貌似一千多一盒！

感谢提供信息

刚才看了下，过滤容量才0.5ml，好像不太适用啊，一般定容都是1ml的

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sukiliang

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2013/8/9 20:08:47 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小丶风(yujianlin) 发表:
原文由 sukiliang(sukiliang) 发表:
原文由 小丶风(yujianlin) 发表:
楼主用的什么液相？
那样品瓶是从哪里买的？

是否可以通用？

求品牌、货号及价格（方便的话）

我们是用安家的液相！

我实验室也有水的液相，安家的玻璃的样品瓶也能用到水家的液相上，但是盖子使用带切口的盖子！

如果要把这种样品瓶用到水家的液相上最好要用有预切口的瓶盖！

样品瓶也是安家的，货号是5190-1416，价格比普通样品瓶要贵哦！貌似一千多一盒！

感谢提供信息

刚才看了下，过滤容量才0.5ml，好像不太适用啊，一般定容都是1ml的