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主题：【第六届原创】qingqingcao 老师讲HPLC 之 HPLC性能测试

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qingqingcao
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药物分析发表于：2013/08/21 21:10:40 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为qingqingcao原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

HPLC仪器性能检查实验报告





1.          目的

了解HPLC仪器的基本构造和工作原理。掌握HPLC仪器基本操作

熟悉HPLC仪器性能检查的项目和方法

掌握HPLC色谱柱性能指标（有效塔板数，拖尾因子等）的测定方法，鉴别其优劣。

2.          原理

HPLC色谱仪性能指标

2.1.      流量精度 5分钟以 1ml/min收集纯水的重量，记录温度，并且查出对应的体积。计算其流量准确性。

2.2.      检测限——3倍信噪比。（根据中国药典规定）

2.3.      定性重复性（三次测试同浓度萘保留时间 RSD≤2%）

2.4.      定量重复性（三次测试同浓度萘峰面积 RSD≤2%）

2.5.      死体积——以纯水为流动相，以1ml/min流，用一段空管子连接，打一针甲醇。λ=224nm时候，看出峰时间。

2.6.      柱效，以萘为例子，做有效塔板数计算，拖尾因子计算。

3.          器材

3.1.      HPLC

3.2.      色谱柱 C18 (5μm，4.6mm×150mm)

3.3.      100μl平头微量注射器

3.4.      超声波清洗器

3.5.      流动相过滤器，微孔滤膜

3.6.      真空泵

3.7.      容量瓶等

4.          试剂（药）

苯，萘，联苯，菲（AR）,甲醇（HPLC），超纯水

5.          试样配制

称取10mg上述四种样品到各自50ml容量瓶中，用正己烷溶解摇匀。吸取10ml各容量瓶中溶液，到同一个50ml容量瓶中，用流动相定容，摇匀。

萘溶液（做最小检测限）吸取1ml萘溶液，到100ml容量瓶中，流动相定容摇匀。在吸取1ml上述溶液到50ml容量瓶中，流动相溶解定容。此刻浓度为：

流动相配制：量取83ml甲醇，量取17ml超纯水到一个烧杯中，混匀，有机微孔滤膜过滤。超声波超5分钟，直至无气泡。



6.          HPLC条件

流动相：甲醇-超纯水（83:17 v/v）

流速：1ml/min

波长：λ=254nm

7.          步骤

7.1.    死体积测定

纯水 1ml/min ，吸取20μl甲醇，注入色谱系统。



7.2.    流量精度测定（收集5ml）



7.3.    保留时间测试

分别注入：苯，萘，联苯，菲各个单一的样品，看保留时间。



7.4.    检测限测定

样品峰高h：      噪音峰高hN:      最小检测限：c1=2×hN×c/h=

7.5.    重复性测定萘测试



8.          塔板数测试（以萘计算）







9.          思考

下次你测试的这根色谱柱塔板数少了许多，说明什么问题？





有效塔板数你认为它的意义是什么？





拖尾因子好坏说明色谱柱装填中有什么问题？

Ｔailing factor ＜ 0.95



Tailing factor =1.0



Tailing factor ≥1.05
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2013/8/21 21:14:32 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。
相关的数据，我到学校补上，作为原创。
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zhw19811005
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2013/8/21 21:32:16 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只有做过之后，对仪器的认识才会更加深刻
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wodedipan
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2013/8/22 13:50:34 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
去年我们五台agilent都是我做的，大体一致。楼主没有检测器的性能测试吗？
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zyl3367898
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2013/8/24 17:38:45 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以在仪器上试试，印象会深刻。
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xiaowang268
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2013/8/25 11:37:17 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:
这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。
相关的数据，我到学校补上，作为原创。


现在的拖尾因子都是仪器自己算的啊
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2013/8/25 11:44:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhw19811005(zhw19811005) 发表:
只有做过之后，对仪器的认识才会更加深刻


但是在药企一般很少做吧
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qingqingcao
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2013/8/28 14:23:06 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 wodedipan(wodedipan) 发表:
去年我们五台agilent都是我做的，大体一致。楼主没有检测器的性能测试吗？


有的。等我到学校去，把数据找出来，写上呢。
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翠湖园
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2013/8/30 20:58:35 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。相关的数据，我到学校补上，作为原创。
这篇原创数据就是补也不算少了，当然了，补多点更完美！
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xiaowang268
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2013/8/31 15:23:26 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:
原文由 wodedipan(wodedipan) 发表:
去年我们五台agilent都是我做的，大体一致。楼主没有检测器的性能测试吗？


有的。等我到学校去，把数据找出来，写上呢。


检测器一般都是怎么做的呢？
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xiaowang268
xiaowang268
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2013/8/31 15:25:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 翠湖园(hhx050) 发表:
原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:这个实验，我在学校里面给同学们做了，同学们做了之后，他们对仪器的认识更加清楚。
由于这个实验，我在原有的基础上添加了拖尾因子测量，实际上，可以用HPLC自带软件计算，无需用原有的方法来计算。相关的数据，我到学校补上，作为原创。
这篇原创数据就是补也不算少了，当然了，补多点更完美！


感觉做的挺细的
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