主题：【第六届原创】【许愿原创】高效液相色谱重要指标-精密度【jhjs推荐】

高效液相色谱重要指标-精密度

    精密度也叫重复性、稳定性，是高效液相色谱非常重要的技术指标（其它分析、测试、检测等仪器应该也是这样吧），是每台仪器及分析方法都必须满足的指标。如果一台仪器或一个方法连这个指标都达不到，那这台仪器或方法肯定是有问题了，肯定不能用了。

    为了保证仪器或方法的可靠、稳定，适用、可用，实验中是经常要做精密度的测试的，只有精密度的数据满足要求，做出的结果才有意义。

精密度测试的条件：

1. 测试时实验条件一致，包括实验室条件，如实验室温度、湿度、风度等，进样量相同，样品、流动相一致，实验时间相同等。

2. 测试实验设备相同，包括实验仪器、色谱柱、进样针等必须是同一套。

3. 如果是手动进样，操作者最好是同一人。

4. 实验过程必须一致。

注明：厂家测试色谱条件一般（以紫外检测器为例）如下：

1. C18色谱柱，Venusil XBP C18(L)  (250×46mm，5μm)

              S/N:V9520525CK0043。

2. 进样量（以手动进样器为例）20ul。

3. 流动相，甲醇。

4. 测试波长，254nm。

5. 流速，1.0ml/min。

6. 样品，1.0 X 10^-4g/ml 萘/甲醇溶液（来自国家标准化中心）。

7. 色谱柱温度，室温。

8. 实验次数，一般为6次。

色谱图：

    结果：国标精密度标准，定性小于等于3.0%，定量小于等于2.0%。实际测试一般都会优于这个指标，手动进样定性一般会小于0.5%，定量小于1.0%；自动进样器进样，定性一般小于0.3%，定量小于0.5%。

用户色谱条件要依据具体实验条件（以某样品中防腐剂山梨酸检测为例）：

1. 色谱柱，C18色谱柱。

2. 进样量（以手动进样器为例）20ul。

3. 流动相，甲醇：0.02mol/L乙酸铵溶液=5:95（V：V）。

4. 测试波长，230nm。

5. 流速，1.0ml/min。

6. 样品，某样品（测试其中的防腐剂山梨酸）。

7. 色谱柱温度，室温。

8. 实验次数，一般为3次。

色谱图：

    结果：实验精密度要求（比如）定性小于等于1.5%，定量小于等于1.0%。

当然也有做6次验证的，谱图如下：

    影响精密度测试的因素：影响精密度测试的因素很多，除以上所说的测试条件外，还有一些由仪器、设备等故障或一些意外引起的等。具体如下：

1. 液路流速不稳，主要影响定性精密度，如液路流速不稳、堵塞、漏液等。

2. 进样器对样品的定量不准（或不稳），主要影响定量精密度。

3.  色谱柱柱效差或被污染，会影响定性、定量精密度。

4. 检测器污染，主要影响定量精密度。

5. 氘灯能量低或检测器光路有故障，影响定量精密度。

6. 样品浓度过高或过低，不在仪器线性范围内，影响定量精密度。

7. 色谱柱选择不对或平衡时间不够，影响定性、定量精密度。

8. 进样器后面的液路有堵塞、漏液、气泡等故障，影响定性、定量精密度。

9.  样品稳定性差，影响定量精密度，也可能由于样品变质影响定性精密度。

10. 样品中融入气泡。

11. 流动相挥发、变质等。

12. 样品挥发或溶解样品的试剂挥发，影响定量精密度。

    精密度是仪器包括高效液相色谱非常重要的指标之一，是验证实验仪器和设备是否有故障，是否可用，实验方法是否适用的依据。精密度指标的测试也是非常重要的。影响精密度结果的因素一般有实验仪器或设备是否完好，测试条件是否一致，测试操作是否规范、正确。如果是仪器或设备故障的原因，一定得排除故障；如果是测试条件或操作的原因，一定得完善或客服。切不要因为测试条件不一致或操作不规范、不正确影响测试结果，造成错误判断，影响实验进程，带来不必要麻烦和损失。

    仪器的性能有很多是相互联系的，比如泵流速不稳会影响到仪器的基线和噪声，从而影响精密度、准确度和检出限，进样阀定量不准，色谱柱柱效差也会影响到精密度、准确度和检出限，氘灯能量低或不稳也会影响基线、噪声，影响到精密度、准确度和检出限等。仪器检出限（灵敏度）低，对某些信号响应小，一般来说精密度和准确度反而却高；准确度低了，精密度和检出限很有可能没什么影响。所以有些指标低了其它指标可能会高，也可能会低，也有可能没什么变化。具体问题具体分析，找到根源解决掉问题这才是最终的目的。碰到问题思路要清晰，一般要先分析问题，通过排除、实验找问题，然后确定问题，确立解决方案，以至最终解决问题。

    做精密度验证实验就是要检验仪器或方法的可靠性、实用性，切记：

1.绝不能在仪器性能没稳定前做实验。

2.已发现仪器有故障，实验结果只能验证仪器的故障程度，不能验证仪器正常时的真实性能。

3.实验数据不理想要分析和排除是否是由实验条件和操作失误引起的。

    精密度对于实验非常重要，以上是本人对精密度的理解和个人经验的总结，供大家参考和分享。当然可能还有不完善的地方，还敬请大家多提宝贵的意见和建议。小弟在此多谢了！

    人多力量大，我上面主要介绍了仪器精密度的验证，下面就有三人行老师对色谱方法的验证做了补充，非常感谢三人行老师！同时也期待各位版友前来补充，前来分享！