主题：【第六届原创】姜黄素对β-淀粉样蛋白致小鼠空间学习记忆障碍的改善作用

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haiyang

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发表于：2013/12/26 14:10:47 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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姜黄素对β-淀粉样蛋白致小鼠

空间学习记忆障碍的改善作用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种常见的慢性进行性精神功能衰退性疾病。近年来，研究发现AD患者大脑中的主要成分β-淀粉样蛋白（Aβ）明显增多，Aβ可能是该病发病机制的起始因素和关键环节。

姜黄素为二苯庚烷类化合物具有较明显的抗炎、抗菌、降血脂、抗老年痴呆，但其是否可以对抗Aβ引起的神经毒性未见报道。本文通过研究其对Aβ引起的记忆障碍模型小鼠的保护作用]，为临床可能应用姜黄素治疗老年性痴呆症提供依据。

本题为探讨姜黄素对β-淀粉样蛋白25-35致小鼠空间学习记忆障碍的改善作用。方法采用侧脑室一次性注射β-淀粉样蛋白4μl导致小鼠空间学习记忆障碍模型，采用隐藏平台获得实验和空间搜索实验，观察姜黄素J（5、2、1 mg·kg-1）对空间学习记忆障碍模型小鼠的保护作用。结果显示姜黄素各个剂量组均能明显改善β-淀粉样蛋白致小鼠空间学习记忆障碍，能明显缩短寻找站台潜伏期和游泳路径。

材料与方法

1 材料与仪器

1.1 动物雄性昆明种小鼠，上海实验动物中心提供。

1.2 药品和试剂

1.2.1 姜黄素：分析纯，天津尖峰药业。黄色粉末，，5%丙二醇水溶液溶解。

1.2.2Aβ25-35：购自日本。凝聚态Aβ25-35的制备：将10 mgAβ25-35溶于10 mL无菌生理盐水中，浓度为1 mmol·L-1，密封后置于37 ℃培养箱中孵育1周，使其变为凝聚状态的Aβ25-35。冷冻保存，备用。

1.2.3其它：正丙醇，天津大茂试剂厂，分析纯。生理盐：实验室自制。

1.3 主要仪器设备：

Morris水迷宫装置：成都仪器厂。

THZ-C-1型台式冷冻恒温振荡器：上海圣科仪器设备有限公司。

TN-100B型托盘式扭力天平：河北科宇。

KQ-250A型超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。

台式电热鼓风干燥箱：北京中科环试仪器有限公司。

2Morris水迷宫实验

Morris水迷宫实验装置由一个不锈钢制成的圆柱形水池和一可移动位置的圆柱形透明有机玻璃站台组成。水池直径120 cm，高50 cm，站台直径12 cm，高24 cm。水池上方通过摄像机与计算机连接，利用计算机软件对动物的活动进行全程跟踪，并记录下游泳轨迹（大致分为边缘型、随机型、趋向型和直线型）、游泳路径长度、找到站台所需的时间（即潜伏期）。

水池水深25 cm（高出站台1 cm），水温控制在（23±0.5）℃，在水池边缘上等距离设东西南北四个标记点，将水池均等的分为4个象限，站台置于第一象限。

2.1隐藏平台获得实验（The test of gaining concealed platform）/定位航行实验(place navigation) 小鼠80只，随机分成5组，每组16只，生理盐水(NS)对照组，Aβ25-35模型组，姜黄素10.0 mg·kg-1﹑1.0 mg·kg-1﹑0.1 mg·kg-1剂量组。第一天生理盐水对照组每只小鼠侧脑室注射生理盐水3μl,其余各组小鼠侧脑室注射Aβ25-353μl，造成小鼠痴呆模型。第一天至第十六天生理盐水对照组和Aβ25-35模型组腹腔注射溶剂0.1ml·10g-1，姜黄素各个剂量组分别腹腔注射不同浓度的姜黄素（5 mg·kg-1﹑2 mg·kg-1﹑1 mg·kg-1) 0.2ml·10g-1。连续给药16d，第11至15天腹腔注射给药1h后进行隐藏平台获得实验。每天训练4次，每次历时120秒。每次按不同的入水点放入小鼠，如在120秒内未找到平台，将小鼠引至平台，潜伏期记为120秒。小鼠爬上站台后停留20秒，休息60秒之后再进行下一次训练。每只连续训练5天，记录各组小鼠逃避的潜伏期、搜索策略，等。

2.2 空间搜索实验第16天撤除平台,任选一入水点将小鼠放入水中，游120秒，记录小鼠穿越平台的次数。

结果

1统计学处理

文中结果用SPSS 10.0统计软件进行处理，以均值±标准差（[img=,14,16]file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-15914.png[/img]±S）表示，组间差异显著性检验用t检验分析。Morris水迷宫实验中，小鼠搜索站台的方式可分为4种：随机式（random）、边缘式(circle)、趋向式（taxis）、直线式（line）（见图1)。不同的搜索方式代表小鼠以不同的策略寻找站台，以每组每天训练中某一策略出现的总数占当天总训练次数的百分率表示该策略的出现率（%）。从表1中可以得出在训练的前两天随机式与边缘式所占的比例较大，而随着训练天数的增加趋向式与直线式所占的

比例显著性增加。

2 各剂量组在隐藏平台获得实验中的潜伏期

在隐藏平台获得试验中Aβ25-35可造成小鼠空间学习记忆障碍，随着训练天数的增加小鼠寻找到站台的潜伏期显著缩短。从训练的第二天起模型组与NS对照组相比，寻找到平台的潜伏期显著延长；从训练的第三天起姜黄素各个剂量组与Aβ25-35模型组相比，搜索平台的潜伏期时间不同程度的缩短。可见大黄酚各剂量组均可不同程度地对抗Aβ25-35所致空间学习记忆障碍（见表2）。

3 各剂量组在隐藏平台获得实验中的游泳路径

在隐藏平台获得试验中Aβ25-35可造成小鼠空间学习记忆障碍，模型组与NS对照组相比，从训练的第三天起游泳路径显著增长；姜黄素各剂量组与Aβ25-35模型组相比从训练的第三天起游泳路径显著缩短。可见姜黄素各剂量组均可不同程度地对抗Aβ25-35所致空间学习记忆障碍（见表3）。