主题：【原创】【生活中的仪器分析】不同检测器测定乳及乳制品中牛磺酸含量

不同检测器测定乳及乳制品中牛磺酸含量

牛磺酸是一种非蛋白结构的含硫氨基酸，在促进中枢神经系统生长发育、提高学习记忆能力及延缓衰老等方面具有重要调节作用，特别是对婴幼儿的生长发育起着重要的作用。目前，牛磺酸的测定方法主要有分光光度计法、薄层层析法、氨基酸自动分析法和高效液相色谱法。高效液相色谱不能直接对牛磺酸进行测定，需对牛磺酸进行衍生，常用的衍生试剂有：邻苯二甲醛、2、4-二硝基氟苯、异硫氰酸苯酯和丹磺酰氯等。丹磺酰氯是一种强荧光剂，可用于测定肽链的氨基末端，与肽的N-端氨基酸反应生成丹磺酰-肽，后者水解得到的丹磺酰-氨基酸具有很强的荧光。丹磺酰氯有多种优点：反应专一；荧光强烈；灵敏度比二硝基氟苯法高；丹磺酰-氨基酸不需提取等。本实验采用丹磺酰氯为衍生试剂，采用柱前衍生高效液相色谱法测定乳及乳制品中牛磺酸的含量，并用二极管阵列和荧光检测器分别进行测定，对测量结果进行分析比较。

图1 不同检测器测定牛磺酸校正曲线

二极管阵列检测器测定校正曲线

荧光检测器测定校正曲线

图2 不同检测器测定牛磺酸精密度实验结果

二极管阵列检测器测定牛磺酸标准工作液精密度实验结果（RSD=6）

荧光检测器测定牛磺酸标准工作液精密度实验结果（RSD=6）

二极管阵列检测器测定实际样品精密度实验结果（RSD=7）

2.3 色谱图

图3和图4分别为二极管阵列检测器和荧光检测器对标准工作溶液、婴幼儿奶粉、鲜牛奶及鲜牛奶加标样品在上述色谱条件下测定的液相色谱图。从图中可以看出，采用该方法能够较好的对乳及乳制品中的牛磺酸含量进行测定，并具有干扰少，响应值高，速度快等优点。对牛奶空白样品进行加标试样，结果表明，二极管阵列检测器和荧光检测器的回收率分别为95.32%和93.67%。

图3 二极管阵列检测器测定标准溶液及样品色谱图

24ug/mL标准溶液色谱图1为DNS-Cl;2为牛磺酸衍生物峰

婴幼儿奶粉色谱图

牛奶空白样品色谱图

牛奶加标色谱图

图4荧光检测器检测器测定标准溶液及样品色谱图

24ug/mL标准品色谱图

婴幼儿奶粉色谱图

牛奶空白样品色谱图

牛奶加标色谱图

3 小结

（1）本实验以丹磺酰氯为衍生试剂，采用柱前衍生高效液相色谱法测定乳及乳制品中牛磺酸的含量，该方法具有良好的测定范围，准确度和精密度等优点。

（2）该衍生反应需在碱性条件下进行，且要避光反应。反应的时间、反应温度和衍生试剂加入量对结果的影响仍需进一步实验。

（3）丹磺酰氯对光和湿敏感，不稳定，最好现用现配。丹磺酰氯放置时间久了会生产二氯亚砜并继续分解成其他物质，影响其在有机溶剂中的溶解度。

（4）盐酸的加入，一方面是终止衍生反应的继续发生，另一方面可以调节溶液的pH值，因此加入不同体积的盐酸会改变牛磺酸衍生物的出峰时间，本文并未阐述。

4 疑惑

用荧光检测器测定时，在4min左右出现响应值波动很大的情况，用流动相稀释样品并未消除这一波动，想知道出现这一现象的原因，望高手解答。