主题：【第七届原创】HBcAb（乙肝核心抗体）酶免临床检验及结果判读

HBcAb的检验方法是竞争法，具体说明书，在上篇原创作品    从说明书看酶免实验用到的仪器有哪些？_生物制品_药物分析_仪器论坛


http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20141225/5589734有详细的图示，不在赘述。

其实这次实验的目的是检验一种作用与封闭液中的辅料临床一致性的。该辅料是蛋白稳定剂，在酶标板条的孔中，我们肉眼看上去清澈透明，但都是经过处理的，首先我们会配制一定浓度的乙肝核心抗原，加入到孔中，经过一段时间的温育，用洗涤液洗去未结合到板上的抗原，再将封闭液加入到孔中，温育一段时间后，将封闭液甩去，再将板条拿去干燥房干燥，装袋。这样我们看到的就是这样的中间品了。




因为生产工艺涉及商业机密，所以对于温育的条件，未作出详尽说明。感兴趣的同仁可以找下一本叫做 临床酶免疫测定技术 的书籍，那里可以看到，至少小批量手工操作，也可以做出能用的产品。

该蛋白稳定剂就是封闭液里的一种辅料。当然制成板后，就看不出来了，大家可以把该文字作为临床检验的操作来看。

首先我们要对临床样本进行稀释，用洗液30倍稀释。

下图是洗液，无色透明，主要成分就是PBST+纯化水。



每孔290微升加入到空板条中，注意，这里的空板条是未做任何处理的，里面未进行包被原料，只是将孔作为一个稀释容器，便于排枪加样，毕竟是竞争法，样本里的被测成分，一加到酶标板中就开始和包被的原料起反应，加样速度慢，会导致假阳性。

再向稀释液中加入样本10微升，混合均匀。下图未加入样本的稀释液，为了便于操作，第6，7列特地空了出来。



下面是拼板，因为该实验的目的是检验蛋白稳定剂，所以有对照板和待检板，首先为了使反应条件一致，我们要把板条放到一个框架上。



每孔50微升用排枪加样。



粉红色那把就是排枪了，现在标的就是50微升。对于临床检，如果温育时间过长或者过段，温育温度过高或者过低，都会使结果发生偏移，虽然板条配套的有阴性对照和阳性对照，但仅仅依靠这个，是无法排除板条、酶标、阴阳性对照有问题的，所以我们会加入质控品，相当于各位在其他检验中的标准物质。一个板条框架有96个孔，最靠近温箱壁的最容易受热快，容易有边缘效应，所以我们选择把质控品放在框架的中间，而且临床样本是对称加入，使每个样本在不同的条中依然具有尽量一致的反应条件。



红色的是阳性对照，绿色的是阴性对照。是对称加入的。

再加入酶标记物。50微升每孔。



将板拿去震荡，使样本与酶标记物充分混合，使其对酶标板孔中原料具有同样的结合机会。



37℃温育30分钟。



倒计时结束后，洗板6次。



每次都是先吸出液体，再注入洗液。



细心的朋友可能会注意到板条的一端有黑色条带，那是我们的产品颜色，是为了区分空板条和产品的，而且不同的颜色对应不同的产品。

再加入显色液，先加入缓冲液，再加入底物液。



加入显色液混合均匀后，会隐隐看到蓝色。

现在再温育15分钟。15分钟后，蓝色愈加明显。



因为同时做了4个板子的临床，时间很紧张，未将每个都拍摄。

加入终止液，变色。



读值。



将结果打印出来。



1----6列，是对照。将3个NC加和，取平均值，再除以2，即C.O.=1.048

7---12列，是待检。将3个NC加和，取平均值，再除以2，即C.O.=0.949

因为是竞争法，所以大于C.O.的是阴性。图中LZ1，LZ2，LZ3即质控品。