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凝胶色谱（GPC）
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主题：【第八届原创】凝胶色谱柱测试柱效详细操作步骤

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touda_mf
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发表于：2015/09/01 21:35:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为touda_mf原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
      测试凝胶色谱柱的柱效的重要性就不详细说啦，例如：购买新的柱子时自己验证柱效是否合格？柱子的分离度下降时是否应该更换新柱子？尤其是串联几根的凝胶色谱柱，学会测试每一根的柱子的柱效以决定应该更换哪一根等等。
      一般我们购买新的凝胶色谱柱时都会有一份合格证书，上面有柱效的测试结果，但是也有一些事没有证书的，例如我们用开的HR0.5等。对于有证书的柱子来说，可以参照证书上用的标准品，例如丙酮等。但是由于我们目前使用较多的是紫外检测器，因此我选用的测试柱效的试剂是丙基苯，每一根柱子单独测试。
    第一步，把串联起来的整套柱子拆开，单独接到仪器上，断开检测器，以1ml/min的流速冲洗40分钟，然后接上检测器，开始走基线。
    第二步，按照配溶液的步骤，配制1mg/ml的浓度，0.4μm的的滤网过滤备用。等仪器平衡好后，进样，出来的谱图如下：


      第三步，建立自定义字段。我们用的是W家的仪器，使用的软件是Empower，但是没有安装系统适应性，因此需要通过自定义字段输入公式。进入Empower  pro的界面，进去项目，然后点击自定义字段，建立一个新的自定义字段。名称输入“半峰宽”，字段类型选择“峰”，数据类型选择“实数”，数据来源选择“计算”，，公式输入“1.175*拐点处宽度”，宽度输入“12”，精度输入“6”，最后点击“确定”。重复半峰宽的自定义字段的建立方法，名称输入“半峰宽法柱效”，字段类型选择“峰”，数据类型选择“实数”，数据来源选择“计算”，，公式输入“5.54*（60*保留时间/半峰宽）**2”，宽度输入“12”，精度输入“6”，最后点击“确定”。
      第四步，打开谱图，依照说明书建立柱效测试的积分方法，把积分算法由“传统”改为“Apextrack”，其余参照处理数据的步骤建立积分方法，启动积分即可得到柱效的结果。

该帖子作者被版主 又又1990加 30积分， 2经验，加分理由：第八届原创大赛积分奖励
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又又1990
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2015/9/2 9:31:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
详细操作步骤，感谢楼主分享，也期待您更多的作品。
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zyl3367898
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2015/9/2 17:52:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
后面没有总结吗？少些东西。
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小不董
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2015/9/6 8:34:11 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是这样测定柱效的，但你好像忽略了进样量，empower 不用输入进样量吗？进样量大小对这柱效没影响吗？
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touda_mf
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2015/9/7 20:56:24 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
只要保持同一个进样量就可以跟踪柱效的变化。进样量的多少并不影响柱效的测试，因为定期测柱效也只是为了保证检测结果的准确以及色谱柱的最大利用。
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曹明翔
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2020/2/20 14:08:06 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问楼主本次检测使用丙基苯检测的流动相和紫外检测波长是多少？
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曹明翔
Insm_0ed711a0
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2020/2/20 14:13:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
如果方便可否加一下微信，方便向您请教。我的是18862809270
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mingxiaoyan
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2020/3/1 0:16:37 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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十七
v3073229
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2020/3/14 15:47:21 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了
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之宣
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2020/3/19 22:14:45 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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