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凝胶色谱（GPC）
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主题：【讨论】凝胶色谱

浏览0 回复6 电梯直达
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发表于：2017/12/28 20:59:37 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位版友大家好，本人想用PSS(聚苯乙烯磺酸钠)标准品77000、17000、6800、4300Da 做标线，流动相用的是磷酸盐缓冲溶液(里面加了氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾)，凝胶色谱柱型号为PL1149-6820 aquagel-OH 20 8μm 300×7.5mm Agilent，工作站是安捷伦12600,进样量20μL,流速1ml/min，柱箱温度25℃，标准品用的是一级水溶解(有文献说是用流动相更好)，首先是做的是混合标准样，混合样峰不能很好分开如第一个图所示，接着是单个标样，我把四个重叠起来了，单个样出峰很好如图二。以前采用不同流速，柱箱温度都没有分开过，流动相也改变过，一直没分开，所以恳请大家给我点建议，谢谢！
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2017/12/28 21:01:16 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
由于上传的原因图一和图二显示顺序颠倒了！
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tigertooth
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2018/1/2 10:11:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分不开的，GPC的分离效果本身就不是很好，理论塔板数低，而且你只用一根柱子，所以混标肯定分不开。你就多费点事，一针一针打单标做曲线吧。
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小不董
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2018/1/5 8:31:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
由于你的标准样品分子量值相差不大，若混合标准品，各物质分子量需相差至少一个数量级以上才能有较好的分离。
所以你用单标做可以的，再看看拟合的曲线如何。
还有为啥加氯化钠？
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tigertooth
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2018/3/9 9:47:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
加氯化钠是增加离子强度，增进洗脱。磷酸盐是用来调PH值。加氯化钠没毛病。
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小不董
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2018/3/13 13:08:42 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 tigertooth(tigertooth) 发表:
加氯化钠是增加离子强度，增进洗脱。磷酸盐是用来调PH值。加氯化钠没毛病。

增加离子强度的话，一般用硝酸钠，为啥选择氯化钠？
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lu_sunshine
lu_sunshine
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2018/4/3 10:09:31 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
多加一根色谱柱，适当降低流速
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