主题：【第十一届原创】饮料中乙酰磺氨酸钾检测方法验证报告

饮料中乙酰磺氨酸钾检测方法验证报告

GB/T5009.140-2003

李晓东

一、方法概述
1 范围
本标准规定了饮料中乙酰磺氨酸钾的测定方法。
本标准适用于汽水、可乐型饮料、果汁、果茶等食品中乙酰磺氨酸钾的测定。
2 原理
试样中乙酰磺氨酸钾经高效液相反相C18柱分离后，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。
二、仪器与试剂
1.仪器
1.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器,仪器编号：UNQD-YQF-147
1.2超声波振荡器
1.3抽滤瓶
1.4 G3耐酸漏斗
1.5高速离心机：转速不低于4000r/min。
1.6微孔滤膜0.45μm
1.7层析柱：可用10ml注射器筒代替，内装3cm高中性氧化铝。
2. 试剂
除非另有说明，本方法所有实际均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。
2.1甲醇(CH3OH )：色谱纯。
2.2乙腈(CH3CN) : 色谱纯。
2.3 10%硫酸溶液
2.4 中性氧化铝：层析用100目-200目
2.5 0.02mol/L硫酸铵溶液：称取硫酸铵2.642g，加水溶解至1000mL。
三、分析步骤
1.标准曲线绘制
1.1 乙酰磺酸钾：纯度大于99.9%
1.2标准储备液：准确称取100.0mg（精确到0.1mg）乙酰磺酸钾标准品于100ml容量瓶中，用流动相溶解并定容至刻度，配置成浓度为1mg/ml的标准储备液。
1.3标准工作液：量取标准储备液适量，用流动相稀释成浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL/1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、25.0μg/mL、50.0μg/mL标准工作液。
2.样品的处理
2.1汽水：将试样温热，搅拌除去二氧化碳，吸取2.5mL试样于25mL容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液做HPLC备用。
2.2可乐型饮料：将试样温热，搅拌除去二氧化碳，吸取已除去二氧化碳的2.5mL试样通过中性氧化铝柱，待试样液流至柱表面时，用流动相洗脱，收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液做HPLC备用。
2.3果茶、果汁类食品
称取2.5ml试样，加水20mL混匀后，离心（4000r/min）15 min，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至柱表面时，用流动相洗脱，收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液做HPLC分析用。
3.仪器测定条件
3.1色谱柱：C18柱, 150mm×4.6mm，5μm，或相当者。
3.2流动相：0.02mol/L硫酸铵（740ml-800ml）+甲醇（90ml-50ml）+10%硫酸（1ml）
3.3流速：0.7ml/min
3.4波长：214nm
3.5进样量：10μL
四、结果处理
分析结果的表述
1、计算公式

X(mg/L)=	c× V×1000×f
	m×1000

式中：X-试样中乙酰磺酸钾的含量mg/L或mg/L；
C-标准溶液中乙酰磺酸钾的浓度，μg/mL；
m-试样质量,g或ml；
V-试样最终定容体积，mL；
f-稀释倍数。
五、验证结果
1.线性结果
将标准系列工作溶液分别注入液相色谱仪中， 测定相应的峰面积，以混合标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
Y=33961.4*X-288.187  R^2=0.9994236

表1 乙酰磺酸钾标准系列试验结果

C（μg/mL）	0.05	0.1	0.5	1.0	5.0	10.0	25.0	50.0
A	1292	2886	16454	50563	181428	307900	845643	1704096

  以上结果表明乙酰磺酸钾在0.05μg/mL ~50.0μg/mL范围内，R=0.9997118,吸光值与浓度呈线性关系，线性良好，符合要求。
2.检出限结果
将0.5μg/mL标准溶液逐级稀释至S/N=3±1，得出乙酰磺酸钾的方法检出限为 1.7μg/ml，此检出限结果满足条件。
六、重复性测定
对样品F1807000284进行7次进样，其乙酰磺酸钾测试值如下表所示：

编号	m（ml）	C（μg/ml）	V（ml）	X(mg/L)	X平(mg/L)	RSD(%)
1	2.5	1.857	25	18.57	18.67	0.35
2	2.5	1.866	25	18.66
3	2.5	1.876	25	18.76
4	2.5	1.865	25	18.65
5	2.5	1.874	25	18.74
6	2.5	1.865	25	18.65
7	2.5	1.863	25	18.63

本方法的精密度为 0.35% ，符合《饮料中乙酰磺氨酸钾的测定方法》GB/T5009.140-2003中给出的精密度要求。因此，本次测定均符合要求。
七、准确度验证（加标回收）
对样品F1807000284加标，取乙酰磺酸钾浓度100 .0 μg/mL的标液 0.02mL、0.04mL和0.08ml同样品同步处理后，结果见下表

测定编号		乙酰磺酸钾
序号	m（g）	V（mL）	C（μg/mL）	X（mg/L）	X平（mg/L）	加标量（mg/L）	回收率%
1#	2.5	25	N.D	N.D	N.D	/	/
2#	2.5	25	N.D	N.D		/	/
加标1#	2.5	25	1.863	18.63	/	20	93.2
加标2#	2.5	25	3.561	35.61	/	40	89.0
加标3#	2.5	25	6.978	69.78	/	80	87.2

由上表可以看出乙酰磺酸钾的加标回收范围在 87.2%-93.2% ，RSD值为3.43%符合规定要求。
七、总结
本方法的检出限为1.7μg/ml。小于GB/T5009.140-2003中给出的最低检出浓度4μg/ml。本方法的精密度为 3.45%，符合《饮料中乙酰磺氨酸钾的测定方法》GB/T5009.140-2003中给出的精密度要求.通过对饮料中乙酰磺氨酸钾的测定方法的检出限、精密度和准确度的评价，本方法测定乙酰磺酸钾据准确，结果可信。此方法的准确性好，测定结果真实可靠，可用于饮料中乙酰磺氨酸钾的测定。