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今天接到客户送来的样品,让我们检测一下样品中是否含有杀铃脲,如果含有含量是多少?老规矩先要了解一下杀铃脲,它是一种接触性和胃毒性杀虫剂,属于苯甲酰脲类的昆虫生长调节剂,阻止了昆虫体内合成,使昆虫幼虫虫体畸形而死亡。主要用来防治玉米、棉花、森林、水果和大豆上的鞘翅目、双翅目、鳞翅目害虫,对此类害虫的天敌却无害。此种杀虫药属于低毒杀虫剂,并且效率高,对大多数动物和人无毒害作用,从而被广泛使用。
本次试验将试样用二甲基甲酰胺溶解,通过
液相色谱仪,以C18柱为固定相,甲醇+水为流动相,将有效成分与杂质分开,在波长为254nm下,用紫外检测器,数据处理系统,测定流出峰面积,用外标法,定量有效成分的质量分数。老套路来了先来看看我们的
实验试剂:杀铃脲标准品:已知质量分数为97%;
N,N—二甲基甲酰胺:分析纯;
水:新蒸二次蒸馏水;
甲醇:色谱纯。
接着
实验仪器:高效
液相色谱仪:具有 254nm 波长紫外检测器
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色谱柱:C18不锈钢柱
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微量注射器:50μl。
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流动相过滤器
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电子天平
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超声波清洗器
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我们实验的
色谱条件:流动相:甲醇:水 ﹦80:20
流量:1.0ml/min
检测波长:254nm
进样体积:20μl
开动我的小手开始
样品前处理:轻车熟路的配置好我的流动相:将甲醇和水按8:2比例混合,经过流动相过滤器过滤后,转移至棕色瓶中,超声后备用。流动相到位后我们先给老伙计换上新配的流动相,然后把我们的老伙计启动起来,待仪器自检过后设定好流速和波长后来排气泡,气泡排除完毕,接下来就等待基线稳定了,趁着这个时间我们来处理样品啦。
小心翼翼的开始配置标准品溶液:称取杀铃脲标准品5mg(精确至 0.0002g)于10ml容量瓶中,加入约4ml二甲基甲酰胺溶解,在超声中脱气10min,定容后摇匀。二甲基甲酰胺属于中等毒性物质,可通过呼吸和皮肤接触导致中毒,使用过程中要带手套和口罩。大家配制试剂时要注意试剂瓶上的提示!有毒、有腐蚀性、易挥发的试剂,使用完后第一时间盖好盖子,放置到安全位置。配好后的试剂要写好名字和浓度,以免不必要的错误。
样品溶液:称取样品100mg(精确至 0.0002g)于10ml 容量瓶中,加入约4ml 二甲基甲酰胺溶解,超声脱气、过滤一样不可少。超声波中脱气 10min,定容后摇匀,用0.5μm孔径过滤器过滤,待测。
万事俱备开始测定
测定:仪器基线已经平稳,使用进样针手动进样一针标准品后,我的天呀!峰怎么变成这个样子啦:
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溶剂跟标准品的峰都这么高,而且都平头了,这标品浓度有点高呀,超出检测器范围啦,稀释了五倍后又进了一针,峰又是这个样子啦,
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溶剂咋这么顽固呢,咋还这么高呢,不行我的看看这溶剂咋回事,单独进了一针溶剂,我滴个乖乖,还是那样子,
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仔细一想稀释的是标准品浓度,用溶剂稀释的,溶剂怎么会降下来吗?出峰时间都对,也没影响标准品的峰,先不管他了。接着连续进了三针标准品,标准品峰面积变化相差小于0.5%,随后准备开始进样品了,样品谱图一出来我又懵了,
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这咋还这么点呢,出峰时间没问题呀,问题是不仔细找,我还真看不到他了,毫无疑问跟标品相反浓度太低了,重新称取了100mg样品三分,分别加入了1mL、2mL、5mL的二甲基甲酰胺,先进一针5mL的,
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峰好像还不错,但是还是有一点点小又进了一针,再进一针2mL的看看,
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峰是挺大了但分离的不太好呀,1mL的肯定也分离不好,但是也进一针看看情况吧,
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果然不出我所料。确定好浓度了,让仪器稳定一下后进一针标品,再进两针样品,再进一针标品,完成测定。(确定浓度时每个浓度进两针,这给我折腾一天,闷热和烦躁使我奔溃,一看最后测定的谱图,哎呀呀,虽然外面电闪雷鸣,但是我这心里呀阳光明媚呀!)
测定和结束后结果及讨论
将测得的两针样品溶液以及样品前后两针标准品溶液的峰面积,分别进行平均,按照下式进行计算:
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C样:样品浓度
C标:标准品浓度
A样:样品平均峰面积
A标:标准品平均峰面积
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根据谱图判定样品中含有杀铃脲,计算出样品中杀铃脲的含量为:4mg/100mL。
在此次检测中我第一次遇到标品峰高到出现平峰,但是得到老大指导很快完美解决了,但是溶剂峰确实令我头疼,单进溶剂也是那么高,我就在网上查询答案五花八门,但是仪器没有故障标品峰也对,终于在仪器信息网上看到了答案,那溶剂峰这样不影响样品检测,我们就不用太去纠结他。最后检测完仪器收尾也很重要哦,不要忘记冲洗系统和进样阀哦!在仪器冲洗时间段把实验废液和剩余试剂处理掉,避免他人不小心接触到有毒、有腐蚀性的实验废液,给大家带了不必要的危害。记得检验农残要使用的专用器皿哦,不要和别的器皿混用,以免污染别的器皿。冲洗系统结束后关闭好电源哦!