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主题：【求助】蛋白质检测的问题

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libingyong0056
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发表于：2019/09/06 16:01:59 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我用凯氏定氮法来做的，检测螺旋藻。取0.2-2克的螺旋藻和0.2克硫酸铜，6克硫酸钾，20ml硫酸消化，泡沫消失后直接变成了碳状物质，根本就不会出现蓝绿色透明液体，我都是直接用蒸馏水溶解后过滤的。不知道怎么回事？还有蒸馏后滴定时，颜色还是指示剂的蓝色（用的是甲基红和亚甲基蓝2：1来配置的），看不见滴定终点，不知道哪出了问题？？？？郁闷的很。我以前都没有做过蛋白质这个实验，很多地方不懂，大家指点下。谢谢了
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2019/9/6 16:51:02 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你消化处理时硫酸铜：硫酸钾：硫酸的比例不合适，处理后呈碳状就说明你的样品消解时加入的硫酸钾太多了，硫酸的沸点太高，被挥发光了，蛋白质没有消解出来，
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我是风儿
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2019/9/6 16:59:33 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用蒸馏水溶解过滤这个操作不对，呈蓝色说明没有滴定单终点，估计你的蒸馏液有被碱污染了，整个蒸馏的管路好好洗下，直至空白值正常为止（空白消耗0.1摩尔每升的盐酸液小于0.05毫升）
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sdlzkw007
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2019/9/6 18:06:38 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
现在有现成的催化剂片，可以使用对比一下看看。如果可以的话使用自动凯氏定氮仪，操作简单，结果稳定，现在国产的全自动，半自动凯氏定氮仪有很多，价格不贵。
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Insm_5809e2e3
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2019/9/19 23:15:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.出现碳状，是黑色？
说明消化不完全，可适当延长消化时间
2.消化片或是0.4g硫酸钾/硫酸钠+6克硫酸铜
3.指示剂是用95%乙醇配好后再混合或是临用时加入几滴到硼酸吸收液里，滴定都会有蓝色/蓝绿色/绿色→灰红色
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2019/9/19 23:17:25 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
另外，看不到终点，有没有试过直接倒盐酸进去看变色没有，从而判断是不是含量高没到终点或是盐酸浓度太低
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zftxy2001
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2019/9/20 14:22:04 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由我是风儿(nphfm2009)发表:你消化处理时硫酸铜：硫酸钾：硫酸的比例不合适，处理后呈碳状就说明你的样品消解时加入的硫酸钾太多了，硫酸的沸点太高，被挥发光了，蛋白质没有消解出来，
有道理
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快乐
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2019/9/23 13:56:55 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以前我们同事也遇到过指示剂失效的事，你先确认一下指标剂是否正常
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