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黄芪含量测定
1 材料与试剂
乙腈(色谱级)、正丁醇、氨水、甲醇(分析纯)、黄芪甲苷(购自中检院)、血竭样品(送检样品)。
2 色谱条件
LC-20AT
液相色谱仪(日本岛津),色谱柱:Zorbax SB C18(250mm*4.6μm*5μm)(安捷伦),流动相:以乙腈-水(30:70);蒸发光检测器(奥泰);柱温35℃。
3 样品制备(参照2015年版药典)
3.1 标准品溶液的制备
取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇溶解,即得。
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3.2 样品溶液的制备
取本品中粉约4g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇40ml,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4小时,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水10ml,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水5ml使溶解,放冷,通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm,柱高为12cm),以水50ml洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30ml洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
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3.3 计算方法
分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液20μl,注入
液相色谱仪,测定,用外标两点法对数方程计算,即得。
小结:每次接到黄芪样品大家都会来一句怎么又有黄芪,大概黄芪是比较受嫌弃的中药材之一了,药典上的方法过程比较繁琐,一般需要2-3天才能把前处理处理完。检测简述流程:浸泡过夜——索氏提取4h——旋干——萃取 (4次+2次)——蒸干(这个正丁醇不太好旋干比较耗时)——过大孔树脂柱(上样之前要洗至无醇味,然后上样后用3种溶剂洗脱)——旋干——定容待测。为了减少误差及节省时间,我们考察了正丁醇的萃取次数对含量的影响,我们用2次80ml和4次40ml进行对比发现结果相当,实验操作过程中萃取次数越多反而容易引起操作误差,值得大家注意的是大孔树脂上样前要洗至无醇味,这个对结果影响还是有的,保证数据的平行性,用同体积的水进行洗至无醇味。