工作原理:
流动相通过输液泵流经进样阀,与样品溶液混合,流经色谱柱,在色谱柱中进行吸附、分离,最后每一组分分别经过检测器转变为电讯号,在色谱工作站上出现相应的样品峰。
液相色谱的使用:
首先对样品进行预处理,然后进样,进样完毕后,清洗进样口,每次分析结束后,清洗通道,最后关闭仪器。
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扩展资料:
液相色谱所用基本概念:保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与
气相色谱一致。
液相色谱所用基本理论:塔板理论与速率方程也与
气相色谱基本一致,但由于在
气相色谱中以液体代替
气相色谱中气体作为流动相,而液体和气体的性质不相同。
此外,
液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与
气相色谱不同,所以,
液相色谱与
气相色谱有一定的差别。
主要有以下几力‘面:
①操作条件及应用范围不同
对于
气相色谱,是加温操作。仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质,对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难,致使其应用受到一定程度的限制,据统计只有大约20%的机物能用
气相色谱分析。
而
液相色谱是常温操作,不受样品挥发度和热稳定性的限制,它非常适合相对分子量较大,难汽化,不易挥发或对热敏感的物质、离子型化合物和高聚物的分离分析,大约占有机物的70%~80%。
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②
液相色谱能完成难度较高的分离工作
a.
气相色谱的流动相载气是色谱惰性的,基本不参与分配平衡过程,与样品分子无亲和作用,样品分子主要与固定相相互作用。而在
液相色谱中流动相液体也与固定相争夺样品分子,为提高选择性增加了一个因素。也可选择不同比例的两种或两种以上的液体做流动相,增加分离的选择性。
b.
液相色谱固定相类型多,如离子交换色谱和排阻色谱等,作为分析时,选择余地大;而
气相色谱并不可能。
c.
液相色谱通常在室温下操作,较低的温度,一般有利于色谱分离条件的选择。
③由于液体的扩散性比气体的小105倍,因此,溶质在
液相中的传质速率慢,柱外效应就显得特别重要;而在
气相色谱中,由色谱柱外区域引起的扩张可以忽略不计。
④
液相色谱中,制备样品简单,回收样品也比较容易,而且回收是定量的,适合于大量制备,但
液相色谱尚缺乏通用的检测器,一起比较复杂,价格昂贵。在实际应用中,这两种技术是相互补充的。
综上所述,
液相色谱具有柱效高,选择性高,灵敏性高,分析速度快,重复性好,应用范围广等优点,该法已成为现代分析技术的主要手段之一。目前在化学,化工,医药,生化,环保,农业等科学领域获得广泛的应用。
高效
液相色谱应用非常广泛,几乎遍及定量定性分析的各个领域。
(1)分离混合物
高效
液相色谱法只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
通过与试样预处理技术相配合,高效
液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度,可分离并同时测定性质上十分相近的物质,能够分离复杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的发展,还可在充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分离。
(2)生化分析
由于高效
液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域,并已成为解决生化分析问题最有前途的方法。
(3)仪器联用
高效
液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。高效
液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视,如分析氨基甲酸酯农药和多核芳烃等:高效
液相色谱一红外光谱联用也发展很快,如在环境污染分析测定水中的烃类等.使环境污染分析得到新的发展