原文由 Shy WONG(love418wh) 发表:
Q1:首先把新买的树脂进行预处理:95%乙醇泡24h,用乙醇洗至洗脱液和水混合不浑浊,再用水洗至无醇味。然后用5%盐酸洗,水洗至中性,5%氢氧化钠洗,水洗至中性。(有的文献中没有后面的酸洗和碱洗,请问这个步骤的意义是什么呢?可以省略吗?)
A1:整个过程是活化树脂,酸洗和碱洗不能省略。
Q2:把溶在水里的树脂倒进柱子,敲打柱子,等树脂沉淀后,打开活塞放水,直到距离树脂面1cm关闭活塞。(这一步骤有2个疑问:1.装柱量2/3是指放完水后的树脂占柱子的2/3吗? 2.有的是留1cm高的水,有的是不留,有的还要放一片滤纸,这个应该怎么弄呢?)
A2:树脂量占柱子的2/3,你的理解没错。大孔树脂要液封(留水)。有些柱子可以不用,但是大孔树脂一定 不能让柱子上面干。滤纸非必须。放滤纸的好处是可以在过柱时候将残渣挡住,便于树脂清洁再次活化使用。
Q3: 按照计算的最大上样量,把提取液倒入柱子内,等液面下降至与树脂快平齐的时候,加入洗脱剂,收集洗脱液。(1.最大上样量是不是就是,洗脱液中黄酮浓度几乎等于进样浓度时的体积?2. 加入洗脱剂的时间,是在提取液的液面下降至与树脂快平齐的时候吗?)
A3:最大上样量通过测试出来的,而且与下端活塞中液体的流速相关(一定程度上流速的越低吸收越好)。主要是测试上提取液时候下端流出的液体中是否含待测组分来确定,装样才能知道是否是最大的上样量。这个参数与层析柱内径,填充树脂,流速等很多因素有关。这里一般要设计各因素或者正好试验。
洗脱液通常是上样后吸收一段时间才去洗脱,这个是需要做当因素试验去确认最佳时间。很少有“加入洗脱剂的时间,是在提取液的液面下降至与树脂快平齐的时候”。
Q4上面已回复。
非常非常非常感谢!
我是用80%乙醇提取的样品,洗脱剂也是用乙醇,我看文献用的较多的是95%乙醇,打算用这个。
我们实验室有旋蒸,可以浓缩,就是量不大,感觉挺麻烦。我不太明白浓缩之后再上样的目的是什么呢?是因为过柱子很慢,前期浓缩之后,会缩短整体纯化时间吗?