我做的是样品中的黄酮定性定量,试了许多文献的方法,只有芦丁出峰,但按理说应该还有槲皮素、山奈酚等等,一个是因为其他品种的样品有,另一个是总黄酮含量大小和芦丁含量大小不一致。
在我尝试了浓缩、纯化、酸水解都不行之后,我开始摸索
液相条件
我看了社区的一些精华帖,选定了0-48min,5%-95%乙腈(另一个是1%乙酸),打算先测一下进样体积和流速的影响,结果发现在这个梯度下,无论怎么换别的,只有两分钟左右的溶剂峰,其余一个峰都没有。
所以,我觉得可能得用分段的梯度,但是这个分段怎么分,每一段的流动相占比我不知道该怎么设置,于是就胡乱设置了一下。
比如48min平分成六段,一段8分钟,让乙腈从5%开始往上升,升到100%,再走一个初始比例。
我想问的是:
1. 我上面的思路是对的吗?
2. 大家知道梯度怎么分段设置吗?
3. 有的方法混标跑的很好,槲皮素那些都能出峰,但是样品就是不出槲皮素的峰,这是不是说明我样品里就是没有这些东西?
4. 我现在尝试分析别人的梯度,比如他们的槲皮素8分钟出峰,而梯度是0-10min,30-40%乙腈,这能不能说明,(40-30)/10*8+30=38,38%的乙腈可以洗脱槲皮素,我应该用38%左右的乙腈多走一会?