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主题：【第十三届原创】Westemblot原理及注意事项

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Love to share发表于：2020/09/28 16:41:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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Westemblot原理及注意事项

一Westemblot原理

与Southem或Northem杂交方法类似但Westem blot 采用的是聚丙稀酰胺凝脉电泳(PAGE )，被检测物质是蛋白质,“探钱”是抗体，“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到同相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固像载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术广泛应用于检测蛋白水平的表达。既可以定性，又可以半定量的westerm是初步鉴定蛋白质最方便也是最通用的方法。

二注意事项

配胶前先洗玻璃板，至水流能够顺利流下且无卡顿，存胶面朝外，通风处内烘干，玻璃板一定要洗干净，这是后续实验成功的基础。

清洗配胶的容器——小烧杯。同样在通风厨内烘干。

烘干玻璃般的同时可进行配胶。

分离胶凝固后倒掉液封用的乙醇，可用滤纸吸出剩余的乙醇，切记滤纸不能接触到分离胶。

分离胶凝固后加积层胶，一定要加满，一定要加满，否则会出现气泡致使泳道破坏。

关于加样，一定要提前将蛋白质样品拿出来冰上解冻。

加样时为枪头抵住长板压短板，且枪头朝下，

加样前小离心机离心解冻的样品，使样品不挂壁，之后涡旋混匀。

翘胶板时，胶留在长板上，这样容易记录加样顺序。

关于发光，若不显现蛋白条带，可静置几秒，重新进行发光。

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小不董
doxw0323
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2020/10/28 9:43:46 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分析还是要认真仔细，每个步骤严格按照要求做就行。
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