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液相色谱（LC）
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主题：【分享】【实战宝典】如何测试液相色谱柱的柱效？

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小官人
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发表于：2021/03/18 22:42:05 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
解答：JJG 705-2014《液相色谱仪检定规程》中规定了液相色谱柱柱效的测试方法，具体测试方法如下：

（1）测试用标准溶液：反相色谱柱测试用的标准溶液为1×10-4g/mL尿嘧啶、 1×10-5g/mL联苯和蒽（荼）的甲醇溶液；正相色谱柱测试用的标准溶液为1×10-2mL/mL甲苯和1×10-4 mL/mL硝基苯的正己烷溶液。

（2）将被测试的色谱柱接到检定合格的液相色谱仪器上，反相柱用甲醇+水（85%+15%）为流动相，正相柱用正己烷+异丙醇（99.5%+0.5%）为流动相，流速为1mm/s （内径为4.6 mm色谱柱，流量为1.0mL/min），紫外检测器波长为254 nm，灵敏度选择适中。仪器稳定后，从进样口注入10μL对应的色谱柱测试标准溶液，记录色谱图。

（3）柱效（理论塔板数）和色谱峰对称性的计算

由式 （2-1）计算液相色谱柱柱效理论塔板数，重复测量3次，取平均值。

    （2-1）

式中，n为理论塔板数；tR为色谱峰的保留时间，时间测量需精确到0.02min；

为色谱峰半高峰宽；L为色谱柱长。

按照上述条件测得的色谱图中，按式2-2计算色谱峰的不对称因子As。

As =b/α                             （2-2）

式中，a，b分别为通过峰高处、平行于峰底的直线被峰两侧及峰高截取的两线段的长度。

（4）液相色谱柱性能要求

柱效：反相色谱柱的理论塔板数一般在3~4×104m-1范围内，正相色谱柱的理论塔板数在4~5×104m-1范围内。

色谱峰对称性：被测峰（蒽）的不对称因子As一般在0.8~1.6范围内。

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